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《复旦大学》 2008年
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HOXA10在卵巢透明细胞癌中的表达及对其增殖和侵袭的影响

李斌  
【摘要】: 同源框基因HOXA10属同源异型盒家族HOXA族。研究显示,HOXA10参与女性苗勒氏管发育并在正常女性子宫、阴道上皮组织中表达。近年有资料显示,HOXA10不仅在孕早期子宫内膜上皮分化和间质蜕膜化中起重要作用,还可能参与调控源于异位子宫内膜的卵巢癌的发生。 卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell adenocarcinoma,OCCA)的细胞组织结构及免疫表型与子宫内膜及阴道的透明细胞癌极其相似,故目前多数学者认为卵巢透明细胞癌起源于苗勒氏管。由于卵巢透明细胞癌患者合并子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)有高达25%—55%,一些学者提出卵巢透明细胞癌很可能来源于异位子宫内膜的恶变,非典型子宫内膜异位症(atypical endometriosis,AEMs)可能是癌前病变,是介于典型子宫内膜异位症与恶变的中间步骤。但是HOXA10在异位子宫内膜恶变和卵巢透明细胞癌形成过程中具有怎样的生物学影响至今尚未见文献报道。 本研究分两部分:(1)观察同源框基因HOXA10在卵巢透明细胞癌和异位子宫内膜中的表达及其与临床预后的相关性分析;(2)应用脂质体转染技术观察HOXA10的表达对卵巢透明细胞癌ES-2细胞增殖、运动和侵袭的影响。 第一部分HOXA10在卵巢透明细胞癌组织中的表达 目的检测HOXA10在卵巢透明细胞癌、正常卵巢、正常在位内膜、卵巢内膜样囊肿及其对应的在位内膜组织中mRNA和蛋白水平的表达,比较它们的表达差异,并分析其与临床预后的相关性。 方法应用RT-PCR法检测卵巢透明细胞癌、正常在位内膜、卵巢内膜样囊肿及其相应在位内膜组织中HOXA10基因的表达;应用免疫组织化学法检测卵巢透明细胞癌、正常卵巢、正常在位内膜、卵巢内膜样囊肿及其相应在位内膜石蜡组织中HOXA10蛋白表达。 结果(1)卵巢透明细胞癌组织中可以检测到明显的HOXA10表达。卵巢内膜样囊肿上皮中未检测到HOXA10的表达,其相对应的在位内膜,随月经周期的不同有不同程度的表达,其中表达阳性的患者,月经周期多处于围排卵期,病理学检查证实均为分泌期子宫内膜;未合并内膜异位症患者的在位内膜与合并内膜异位症患者的在位内膜的HOXA10表达相似。(2) HOXA10蛋白的阳性表达与卵巢透明细胞癌患者的年龄及临床分期无关,但与患者的术后5年生存率呈负相关(R=-0.442,P=0.043)。 结论HOXA10在卵巢透明细胞癌中的异常表达与患者的术后5年生存率密切相关,提示HOXA10基因可能参与卵巢透明细胞癌恶性进展。 第二部分HOXA10基因对卵巢透明细胞癌ES-2细胞增殖、运动和侵袭的影响 目的研究人同源框基因HOXA10对卵巢透明细胞癌ES-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法以脂质体稳定转染建立HOXA10表达的卵巢透明细胞癌ES-2细胞,并筛选高表达阳性克隆,应用Western blot方法检测转染效果。将ES-2细胞分为两组,转染空质粒pcDNA3组和转染质粒HOXA10-pcDNA3组,SRB法分别检测各组细胞HOXA10表达对ES-2细胞增殖的影响;采用细胞划痕试验、Transwell小室检测细胞迁移及侵袭的能力。 结果(1)卵巢透明细胞癌ES-2细胞HOXA10转染效率检测,当质粒与脂质体的比例为1:2.5时可以得到较好的转染效率。(2) SRB法检测细胞增殖显示:HOXA10转染组与空载体组A值分别为0.446±0.0024和0.281±0.002(P<0.01)。(3)细胞划痕5小时后,HOXA10转染组与空载体组的迁移距离分别为0.47±0.07mm和0.25±0.03mm(P<0.05)。(4)Transwell小室检测HOXA10转染组和空载体转染组24小时跨膜细胞数分别为446±14个和227±12个(P<0.01)。 结论HOXA10N以通过促进细胞增殖,增加细胞的运动、侵袭能力参与卵巢透明细胞癌的恶性进展。 以上两部分研究结果显示:(1)同源异型盒转录因子HOXA10在卵巢透明细胞癌组织中的异常表达与预后呈负相关;(2) HOXA10在卵巢透明细胞癌中的表达可以通过促进细胞增殖,增加细胞的运动、侵袭能力参与卵巢透明细胞癌的恶性进展。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.31

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