收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PLGA/poloxamer纳米微粒包裹MBD1-siRNA质粒治疗胰腺癌的实验研究

罗国培  
【摘要】: 目的研究载MBD1-siRNA质粒的PLGA/poloxamer纳米微粒在体内、外治疗胰腺癌效果。 方法(1)设计并合成针对MBD1基因的siRNA,通过乳剂溶解挥发法制备包裹MBD1 siRNA质粒的PLGA/poloxamer纳米微粒,研究不同制作条件对纳米微粒形成和物理表征的影响,并通过激光粒度仪和透射电子显微镜对其进行物理表征测定;通过荧光分光光度法测量纳米微粒对含MBD1siRNA质粒DNA的包裹效率和载药量,并进一步测定纳米微粒缓释性、结构稳定性、保护性测定以及生物毒性。(2)在合成包裹MBD1siRNA质粒的纳米微粒的基础上,进一步研究载MBD1siRNA质粒的纳米微粒在体外的转染效率及其对胰腺癌细胞生长和基因表达的干扰作用。通过流式细胞仪检测MBD1 siRNA质粒的PLGA/poloxamer纳米微粒体外的转染效率,通过荧光染色法进一步证实纳米微粒在细胞内的分布,MTT法检测MBD1 siRNA质粒的PLGA/poloxamer纳米微粒不同浓度和不同时间对胰腺癌细胞生长的抑制作用,RT-PCR法检测基因转染后胰腺癌细胞内MBD1mRNA表达的变化,Western blot法检测基因转染后胰腺癌细胞内MBD1蛋白表达的变化,流式细胞仪、TUNEL、Hoechst法检测基因转染后细胞凋亡的改变,流式细胞仪法检测基因转染后细胞周期的改变。(3)在合成包裹MBD1siRNA质粒的纳米微粒的基础上,进一步研究载MBD1siRNA质粒的纳米微粒在体内的转染、抗肿瘤效果及其对基因表达的干扰作用。建立胰腺癌裸鼠腋下荷瘤模型,腹腔注射给药,观察肿瘤体积的改变,通过荧光染色法和透射电镜证实纳米微粒在肿瘤组织内的分布,RT-PCR法检测基因转染后胰腺癌细胞内MBD1mRNA表达的变化,Western blot法检测基因转染后胰腺癌细胞内MBD1蛋白表达的变化,流式细胞仪、TUNEL法检测基因转染后细胞凋亡的改变,流式细胞仪法检测基因转染后细胞周期的改变,HE染色观察肿瘤超微结构的改变。 结果(1)PLGA/poloxamer纳米微粒呈圆形,粒径约为200nm。不同的包裹内容物对纳米微粒的粒径无明显影响,载质粒DNA的纳米微粒较载水的纳米微粒的zeta电位略有增加。当PLGA/poloxamer比例为1:1、PLGA分子量为8000Da和涡旋时间为60秒时形成的纳米微粒粒径最小,Zeta电位负值较低,P.I.较小,粒径分布较为集中。PLGA/poloxamer纳米微粒对质粒DNA的包裹效率约为31%,载药量约为1.55μg/mg。从纳米微粒释放的质粒DNA的结构在制备过程中未受到损害。PLGA/poloxamer纳米微粒具有缓释性、保护性和低或无生物毒性等特点。(2)纳米微粒在体外的转染效率约为28%,并且在转染后第一至第七天都能保持相似的转染效率。溴化乙锭标记的MBD1siRNA纳米微粒被细胞吞噬,并且部分纳米微粒已进入细胞核。抗增殖实验中,随着载MBD1siRNA PLGA/poloxamer纳米微粒浓度的增高,细胞的活力逐渐下降;另外,浓度为2.0mg/ml的载MBD1siRNA PLGA/poloxamer纳米微粒在不同时间的抗增殖效应相似。MBD1 mRNA基因和蛋白的表达量都逐渐减少。TUNEL法、流式细胞仪和Hoechst染色法检测发现,MBD1siRNA纳米微粒给药组的BxPC-3细胞中存在明显的凋亡细胞,单纯质粒组凋亡比例为4.79%,而MBD1siRNA纳米微粒组凋亡比例为24.19%。流式细胞仪检测发现,MBD1siRNA表达后,胰腺癌BxPC-3细胞的细胞周期发生明显变化。(3)MBD1siRNA纳米微粒组动物肿瘤体积明显小于空白对照组和单纯质粒组。透射电镜下纳米微粒分别存在于肿瘤细胞间隙间和肿瘤细胞浆及细胞核内。荧光显微镜下观察到纳米微粒分布于动物肿瘤组织中。RT-PCR检测MBD1siRNA纳米微粒组MBD1mRNA基因的表达量逐渐减少,Western blot检测MBD1siRNA纳米微粒组MBD1蛋白的表达量逐渐减少。流式细胞仪检测空白对照组细胞凋亡比例为10.87%,S期占总细胞周期的8.01%,而载MBD1 siRNA纳米微粒给药组细胞凋亡比例为21.53%,S期占总细胞周期的15.74%。TUNEL法可见MBD1siRNA纳米微粒组存在更多的凋亡细胞。病理切片检查发现,载siRNA纳米微粒给药组动物肿瘤组织中存在明显的坏死细胞。结论(1)PLGA/poloxamer纳米微粒是胰腺癌基因治疗的理想载体,具有缓释性、无毒性等优点;(2)MBD1是胰腺癌的理想治疗靶点之一;(3)载MBD1siRNA的PLGA/poloxamer在体内外都能发挥抗胰腺癌BxPC-3细胞的效应,能促进肿瘤细胞凋亡和周期的改变。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈昕,张漪丽,司士辉;纳米微粒增敏的压电化学传感器[J];湖南师范大学学报(医学版);2004年01期
2 王风秀,王军;纳米药物制剂的研究现状[J];医药导报;2005年10期
3 殷香保;黎洪浩;陈汝福;叶华;任山;王捷;区庆嘉;;聚乳酸阿霉素纳米微粒的制备及体内外释药的研究[J];中华实验外科杂志;2006年02期
4 谢宇;尚晓娴;蒋丰兴;胡金刚;;羟丙基壳聚糖纳米微粒的制备(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年23期
5 ;德国发明肺癌治疗新方法:纳米微粒作为药物载体[J];生物医学工程与临床;2009年03期
6 王磊石;于文芳;;微米与纳米二氧化硅对肺组织影响光镜下比较研究[J];中国卫生检验杂志;2010年05期
7 李奥;王志刚;吴伟;苏敏;余进洪;陈维娟;罗银灯;赵建农;;载Fe_3O_4液态氟碳纳米粒增强磁共振成像的实验研究[J];中国医学影像技术;2011年03期
8 孙丹丹;闫雪生;;纳米微粒靶向治疗脑癌研究进展[J];中国医药指南;2011年21期
9 邓联东,孙多先,董岸杰;载药聚乳酸纳米微粒的制备[J];中国中药杂志;2002年07期
10 王丽曌;王雨生;;壳聚糖纳米给药系统及其在眼科学领域的应用[J];国际眼科杂志;2008年04期
11 吕国士;许乙凯;;新型MR特异性对比剂Gd-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒的合成及其肝脏靶向性(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年08期
12 李波;丛锐;雷伟;吴红;范黎;付索超;万世勇;;阿仑膦酸钠明胶纳米微粒制备和体外释药试验[J];中国骨质疏松杂志;2007年05期
13 吕桂香;彭海生;刘希君;王菁华;孙博;戢玉环;赵然;王琪;王广友;王丹丹;李呼伦;;伏立康唑PLGA纳米微粒的制备及其形态和释放特点分析[J];中国生物制品学杂志;2008年01期
14 郝保同;刘宝林;;纳米微粒在细胞低温保存中的应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年41期
15 阮星星;周祥福;;碳包膜纳米磁体作为热疗材料的运用[J];中华腔镜泌尿外科杂志(电子版);2008年02期
16 薛惠文;章静波;;视网膜病变的基因治疗[J];基础医学与临床;2010年10期
17 唐黎之;王志刚;;纳米微粒在分子成像中的研究进展[J];中国医学影像技术;2010年10期
18 冯爱玲,吴道澄,吴红,杨青艳;荧光素三元共聚纳米微粒的合成及其荧光性质[J];第四军医大学学报;2005年04期
19 黄开红;刘建化;王凌云;朱兆华;陈其奎;闵军;陈汝福;;载5-FU纳米微粒抗肿瘤的实验研究[J];中国病理生理杂志;2007年09期
20 兰小川;陈辉;顾海鹰;徐学东;;环孢素A壳聚糖纳米微粒防治增生性玻璃体视网膜病变[J];眼科研究;2007年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张秋丽;王瑞祥;邹德宝;;纳米微粒对冷冻机油粘度影响的研究[A];2004空调器、电冰箱(柜)及压缩机学术交流会论文集[C];2004年
2 张平余;薛群基;;LaF_3纳米微粒LB膜摩擦学行为研究[A];第十一次全国电子显微学会议论文集[C];2000年
3 巩雁军;高明远;;PNIPAM/CdTe纳米微粒复合荧光微球的制备[A];中国化学会第十届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2004年
4 许并社;陆路;赵兴国;贾虎生;梁伟;市野濑英喜;田中俊一郎;;电子束照射下金纳米微粒的接合[A];第十一次全国电子显微学会议论文集[C];2000年
5 赵明;李安民;常津;王汉杰;;利用生物多聚体纳米粒子包载提高脑胶质瘤细胞内药物浓度[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
6 李贵平;汪勇先;张一帆;张春富;;~(188)Re标记的Herceptin免疫磁性纳米微粒的体外抗肿瘤作用的实验研究[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年
7 李贵平;汪勇先;张春富;张辉;;~(88)Re标记免疫靶向磁性纳米微粒及其生物学分布[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年
8 李贵平;张辉;汪勇先;张春富;;~(188)Re标记免疫靶向磁性纳米微粒及其生物学分布[A];第三届全国核素显像暨核素治疗学术交流会论文汇编[C];2006年
9 李贵平;张辉;汪勇先;张一帆;张春富;;~(188)Re标记的Herceptin免疫磁性纳米微粒的体外抗肿瘤作用的实验研究[A];第三届全国核素显像暨核素治疗学术交流会论文汇编[C];2006年
10 牛新书;刘艳丽;胡平;徐甲强;;WO_3纳米微粒的制备及气敏特性研究进展[A];中国电子学会第七届学术年会论文集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 罗国培;PLGA/poloxamer纳米微粒包裹MBD1-siRNA质粒治疗胰腺癌的实验研究[D];复旦大学;2010年
2 宁杨;纳米微粒与聚合物复合新方法的研究[D];吉林大学;2011年
3 石文兵;基于纳米微粒模拟酶的光分析方法构建及其应用研究[D];西南大学;2011年
4 张泽富;四氧化三铁纳米微粒强化射频消融热能传输的实验研究[D];华中科技大学;2010年
5 杜文理;载金属离子氨基多糖纳米微粒的抗菌作用及其对大鼠免疫功能的影响[D];浙江大学;2008年
6 杨广彬;Cu纳米微粒的制备及其摩擦学行为研究[D];河南大学;2012年
7 韦建军;自悬浮定向流法制备金属与合金纳米微粒及其结构物性的研究[D];四川大学;2003年
8 苗雷英;磁性Fe_3O_4纳米微粒介导TRAIL基因治疗涎腺腺样囊性癌的研究[D];吉林大学;2012年
9 丁丹;负载抗肿瘤药物的高分子纳米材料体内外抗肿瘤效果的研究[D];南京大学;2011年
10 赵彦保;液相分散法制备金属、合金、氧化物、硫化物纳米材料及其摩擦学性能[D];中国科学院研究生院(兰州化学物理研究所);2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孟冬冬;钙化性纳米微粒与人肾小管上皮细胞相互作用研究[D];广西医科大学;2011年
2 张梦娟;金纳米微粒在毛细管电泳、吸收光谱分析中的应用研究[D];西北大学;2011年
3 罗保华;双“J”管表面结垢中钙化性纳米微粒的检测及意义[D];南昌大学;2010年
4 刘才;纳米微粒液/液界面自组装及其在电分析中的应用[D];湖南大学;2009年
5 李慧;新型荧光介孔纳米微粒的制备及应用[D];东北师范大学;2011年
6 许耀华;可分散性Cu及其复合纳米微粒的制备和摩擦学行为的研究[D];河南大学;2012年
7 季利亚;碳钢表面纳米水性锌铝涂层的配方及性能研究[D];南京航空航天大学;2011年
8 李艳侠;表面修饰的稀土掺杂氟化物纳米材料的制备及性能研究[D];郑州大学;2010年
9 李业军;键能模型的推广及其在纳米材料中的应用[D];中南大学;2010年
10 蒙勇燕;钙化性纳米微粒和草酸钙晶体与小鼠巨噬细胞系Ana-1相互作用的体外研究[D];广西医科大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 黄堃;有种纳米微粒,能携“弹”杀入癌细胞[N];新华每日电讯;2011年
2 刘丽红;纳米微粒可对抗李斯特杆菌[N];中国食品安全报;2011年
3 秦德岐;德借助纳米微粒治疗癌症[N];中药报;2000年
4 潘辉;张平余;纳米微粒吸波材料问世[N];中国化工报;2004年
5 东方;纳米材料走近纺织[N];中国纺织报;2000年
6 萌云;纳米微粒催化洋葱状富勒烯及制备[N];中国有色金属报;2002年
7 施萌;纳米微粒催化洋葱状富勒烯及制备[N];中国有色金属报;2002年
8 余渡元 张虹 时庆红;纳米技术在包装领域中的应用[N];中国包装报;2001年
9 天华;纳米技术人类又一里程碑[N];福建日报;2000年
10 株洲工学院 杨福馨 刘宇斌;包装领域追踪纳米技术[N];中国包装报;2001年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978