双指标化学发光免疫分析法早期诊断脑部疾病

【摘要】： 随着人类基因组测序的完成,恶性疾病研究的重点从基因组学转移到蛋白质组学研究中。蛋白质多组分同时检测已成为当前生物分析检测的热点,在临床诊断、环境监测等领域有着广泛的应用。与传统平行单一组分分析相比,多组分同时测定具有样品通量高,分析效率高,样本需求少,检测成本低等优点。生物标志物一般定义为疾病发生、发展过程中表达量发生变化的生物分子,可反映疾病发展的程度、治疗效果和预测重复发病率。理想的标志物检测技术可以在复杂生物样品中同时实现多个组分的高灵敏度检测。 化学发光免疫分析法作为一种广泛发展的分析技术,兼有免疫反应的特异性和化学发光分析的高灵敏度。本文利用辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酯酶(ALP)催化发光方法,发展了两种不同模式的双指标同时检测的化学发光免疫分析新技术,应用于脑部疾病(脑胶质瘤和脑卒中)血清标志物分析。论文分为以下三个部分： (1)综述目前多组分检测技术的进展,包括基于标记物识别模式的多组分检测和基于空间位置识别模式的多组分检测,后者包括芯片技术和编码微球技术等。 (2)以聚苯乙烯微孔板为载体,HRP和ALP双标记,构建脑胶质瘤特异性抗原NSE和CA15-3双指标化学发光免疫分析法。检测NSE和CA15-3的线性范围分别为0.2～10 ng/mL(R20.99)和0.2～10 U/mL(R20.99),最低检测限分别为0.2 ng/mL和0.2 U/mL。制备高、中、低浓度的三个模拟血清样本,回收率良好,两种蛋白检测无交叉干扰,有望为脑胶质瘤的临床早期诊断提供坚实的支持。 (3)以磁性微球为载体,构建了一种磁分离双组分化学发光免疫分析技术,测定脑卒中特异性抗原S100β和NSE,均相免疫反应,磁性微球快速分离,双组分之间不存在交叉反应,对S100β和NSE的检测线性范围分别为0.02～1 ng/mL(R20.99)和1～20 ng/mL(R20.99),最低检测限分别为0.005 ng/mL和0.2ng/mL。实验考察了血清对抗原检测灵敏度的影响,结果表明：此法回收率和重现性良好,方法可靠,适合于脑卒中病人的早期诊断。