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《复旦大学》 2010年
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使用向肌细胞诱导分化的大鼠骨髓间充质干细胞复合藻酸钙凝胶注射治疗压力性尿失禁的实验研究

王皓羽  
【摘要】: 目的 压力性尿失禁(Stress urinary incontinence, SUI)是女性泌尿外科常见疾病之一,严重地影响中老年女性的健康及生活质量。我们拟在大鼠动物模型上,使用向肌细胞分化诱导的骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells, BMSCs)复合藻酸钙凝胶(Calcium Alginate)注射于尿道周围组织,以提高尿道阻力,并凭借诱导后干细胞的分化、增殖来修复退变的尿道括约肌组织。本实验作为研究课题的第二部分,研究目的在于建立可操作、稳定的大鼠压力性尿失禁动物模型,并评估向肌细胞分化诱导的骨髓间充质干细胞复合藻酸钙凝胶治疗压力性尿失禁的效果。 材料和方法 第一部分大鼠压力性尿失禁模型的建立和效果评价: 将18只6周龄雌性SD大鼠(体重范围190-220g)随机分成3组:模型组,假手术组及对照组。对模型组大鼠作双侧阴部神经及盆底神经肌支截断,假手术组分离暴露上述神经但不作截断,对照组大鼠不作特殊处理。术后2周以测定发生漏尿时的尿道内压力的方法评估3组大鼠的漏尿点压力(Leak point pressue, LPP)并作统计学分析。压力测定后取正常大鼠及模型大鼠的尿道横截面作组织学比较。 第二部分大鼠骨髓间充质干细胞及诱导后的肌样细胞治疗压力性尿失禁的实验研究: 从2周龄SD大鼠长骨骨髓中分离提取骨髓间充质干细胞,在体外培养增殖。以5-氮杂胞苷10umol/L作用于P2代大鼠骨髓间充质干细胞24小时,诱导其向肌细胞分化,继续培养3周后备用。将108只6周龄雌性SD大鼠(平均个体质量205.36±10.60g)平均分为6组,首先全部以切断双侧阴部神经及盆底神经肌支的方法建立压力性尿失禁模型,术后2周时6组大鼠作分别处理:干细胞悬液组于膀胱颈尿道移行部2点、10点处注射大鼠骨髓间充质干细胞悬液,每点20u1;肌细胞悬液组于同样部位同样剂量注射肌样细胞(经向肌细胞分化诱导的骨髓间充质干细胞)悬液;同法,单纯凝胶组注射单纯藻酸钙凝胶,干细胞凝胶组注射骨髓间充质干细胞复合藻酸钙凝胶,肌细胞凝胶组注射肌样细胞复合藻酸钙凝胶。而空白对照组在解剖游离膀胱颈后不作注射。 将每组18只大鼠再分为3小组,分别于1周、4周、8周时间点测定漏尿点压力,作统计学分析。取4周、8周大鼠的尿道横截面作HE和Desmin染色作组织学比较。 结果 第一部分:假手术组1只大鼠于术后1周死亡。余大鼠皆存活并顺利测定漏尿点压力。与正常大鼠相比,模型组大鼠平均漏尿点压力显著下降(P=0.001),而假手术组大鼠与对照组大鼠平均漏尿点压力无明显差异(P=0.706)。组织学检查显示,与正常大鼠比较,模型组大鼠尿道横纹肌排列致密性较差,而肌纤维也出现一定的萎缩。 第二部分:首先对比了首次测量与二次测量测得的漏尿点压力,发现二者均值有差异,但没有统计学意义(P=0.092)。因而采用两次测量平均值计算,评估不同组间平均漏尿点压力的差异。结果发现空白对照组与单纯凝胶组(P=0.007),干细胞复合凝胶组(P=0.014)和肌细胞复合凝胶组(P=0.003)在平均漏尿点上有显著性差异,而与干细胞悬液组、肌细胞悬液组无显著性差异。空白对照组各时间点测得的平均漏尿点压力无显著差异。组织学检查发现各组尿道横截面标本在括约肌密度、肌肉纤维粗细上未发现明确的差异。单纯凝胶组、干细胞凝胶组及肌细胞凝胶组4周、8周标本在连续切片中均发现了凝胶聚集区域,HE染色下3组凝胶形态相似,Desmin染色下单纯凝胶组较其他两组Desmin阳性表达明显减弱,Desmin染色下单纯凝胶组的弱阳性表达与凝胶和染色剂粘附有关。各组4周与8周标本相比未见明显差异。 结论 通过切断双侧阴部神经和盆底神经肌支,可建立稳定的、较接近压力性尿失禁的动物模型。 使用凝胶(单纯凝胶或复合细胞凝胶)注射于尿道周围可以提高压力性尿失禁模型大鼠的漏尿点压力,但压力性尿失禁模型大鼠的漏尿点压力的提高与凝胶体积效应相关度大。 在注射后8周时,经5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化在体内维持稳定;体内局部环境有诱导骨髓基质干细胞向平滑肌样细胞分化的可能。具体细胞在体内将来的转归仍有待继续观察。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R694.54

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