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《复旦大学》 2010年
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TFPI-2在子痫前期发病机制中的作用

周琼洁  
【摘要】: 目的 本研究拟通过临床研究分析正常妊娠和子痫前期孕妇孕妇和胎盘中TFPI-2的表达特点,从整体水平研究TFPI-2与子痫前期发病的关系;应用RNAi和转染技术下调/上调滋养细胞中TFPI-2基因表达水平,研究TFPI-2对滋养细胞增殖、分化、凋亡、侵袭等生物学行为的影响,从细胞水平研究TFPI-2在子痫前期发病中的作用。 方法 本研究检测正常非孕妇女、各孕周正常妊娠孕妇血清、产后母胎血清TFPI-2水平和胎盘表达,与子痫前期比较差异。应用时间分辨免疫荧光分析法和免疫组织化学法进行检测。采用转染技术上调、下调TFPI-2基因在滋养细胞株BeWo细胞表达后,评估细胞功能,包括boyden小室观察运动、侵袭能力的变化,CCK-8法检测增殖能力的变化,Hochest染色、TUNEL法和流式细胞周期法分析对细胞凋亡的影响,以及应用酶联免疫法检测人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)水平评价分化功能,从而在体外实验中确定TFPI-2基因对滋养细胞株BeWo细胞生物学性状的影响。 结果 正常妊娠TFPI-2血清水平随孕周增加而增加,孕39周达最大值(282.6±17.1ng/ml),产后立即迅速下降至非孕水平(32.3±7.1ng/ml),胎盘中呈现类似变化。子痫前期中TFPI-2血清水平随孕周降低,胎盘表达增加且随病情进展增高。上调TFPI-2基因表达,BeWo细胞株体外迁移和侵袭能力略下降(p0.05);下调后其体外迁移和侵袭能力明显增强(p0.05)。各组BeWo细胞株转染2d,细胞活力明显受抑制;4d-8d,随着时间延长细胞活力增加。各时点上调TFPI-2细胞活力降低;下调后则显著增加(p0.05)。随着TFPI-2基因表达增加,凋亡指数、TUNEL阳性率随之上升(p0.05)。TFPI-2基因表达对BeWo细胞株分泌β-hCG能力无明显影响(p0.05)。 结论 1.胎盘是孕期TFPI-2重要来源。 2. TFPI-2对维持正常妊娠有重要作用。 3.滋养细胞中TFPI-2表达抑制细胞侵袭、增殖能力,诱导凋亡,可能是子痫前期的病因之一。 创新点 1. TFPI-2可能直接或间接影响滋养细胞的侵袭、增生、分化和凋亡等功能,造成子痫前期的发生,本研究首次具体报道其机制。 2.本课题通过临床研究发现现象(子痫前期与TFPI-2有关);结合体外细胞生物学方法研究其机制(TFPI-2对滋养细胞生物学行为的影响),在整体和细胞水平验证TFPI-2基因在子痫前期发病中的作用。
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R714.245

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