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《上海交通大学》 2019年
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纳米级5-FU醇脂体对大鼠坐骨神经瘢痕增生的效果评价

盛欢  
【摘要】:目的:通过体内体外两种实验途径,初步评价纳米级5-FU醇脂体悬液(5-FU Ethosomal Suspension,5-FU ES)对于大鼠坐骨神经离断损伤模型中神经断端瘢痕组织增生的抑制效果。方法:借助透射电子显微镜(TEM),观察制得的纳米级5-FU醇脂体的大小及形态,再通过激光粒度仪(PCS)测其平均粒径和分散系数;体外实验在原代神经成纤维细胞与背根神经元细胞(Dorsal Root Ganglion,DRG)混合培养体系中,筛选适合周围神经瘢痕成纤维细胞生长的纳米级5-FU醇脂体悬液的适合浓度及培养时间;借助Western blot及Realtime PCR技术,分别测定不同浓度纳米级5-FU醇脂体悬液对混合体系中周围神经瘢痕成纤维细胞分泌I型胶原蛋白表达的影响和核酸水平的变化;体内实验通过建立大鼠坐骨神经离断损伤模型,经苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining,HE)观察不同实验组(正常对照组Normal;0.9%生理盐水组NS;单纯缝合神经外膜组Transaction;0.03%(w/v)纳米级5-FU醇脂体组5-FU ES)周围神经断端吻合口处再生神经髓鞘形态变化,并经由甲苯胺蓝(Tuloidine Blue,TB)染色,统计分析不同实验组神经纤维再生髓鞘形态数量变化以及G值的差异,从而评价周围神经受损功能的恢复效果。结果:(1)当纳米级5-FU醇脂体悬液浓度达到0.03%(w/v),作用时间为48小时,其抑制周围神经瘢痕成纤维细胞增殖的效果最为显著(P0.05)。(2)原代神经成纤维细胞与背根神经元细胞混合培养体系培养48小时后,Western blot结果显示当纳米级5-FU醇脂体悬液浓度达到0.03%(w/v)时,抑制I型胶原蛋白表达最显著;Realtime PCR结果也显示当纳米级5-FU醇脂体悬液浓度为0.03%(w/v)时,对核酸水平抑制作用最明显(P0.05)。(3)周围神经断端吻合口HE染色可以看出,纳米级5-FU醇脂体悬液组吻合口处纤维排列整齐有序,数量少而规则;而NS组和Transaction组吻合口处纤维杂乱无章,数量多且与5-FU ES组比较,存在显著差异。(4)周围神经断端吻合口TB染色可见,NS、Transaction和5-FU ES组的坐骨神经离断吻合口都可观察到再生的神经纤维。其中NS组和Transaction组有髓神经纤维数目较少,髓鞘的厚度较薄,再生神经纤维的髓鞘形成不完善,局部间质有轻度水肿。而5-FU ES组的有髓神经纤维数目较多,髓鞘的厚度明显厚于对照组的再生神经纤维髓鞘厚度,且再生神经纤维形成的髓鞘结构均匀,未见板层间裂开及空泡。(5)测量髓鞘厚度并比较G值得出,5-FU ES组大于对照组,具有显著性差异(P0.01)。结论:在体外,纳米级5-FU醇脂体悬液可对周围神经离断损伤后吻合区域的瘢痕成纤维细胞增生产生抑制作用,还可抑制成纤维细胞合成I型胶原蛋白以及核酸表达;在体内,纳米级5-FU醇脂体悬液对周围神经吻合区域瘢痕组织的形成能够产生抑制作用,还能促进神经纤维的再生,为促进受损周围神经形态及功能恢复提供新的切入点。
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