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《上海交通大学》 2007年
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hNIS基因组织特异性表达介导肝癌核素显像与治疗

陈立波  
【摘要】: 目的:本研究旨在探索鼠白蛋白基因启动子/增强子(mAlb)调控下人钠/碘同向转运体(hNIS)基因的组织特异性表达介导肝癌核素显像和治疗的可行性,为NIS基因作为新型报告基因和治疗基因在基因治疗领域的应用提供实验依据。 方法: 1、质粒构建。采用经典分子克隆技术构建mAlb调控下萤虫素酶表达载体pmAlb-Luc和mAlb引导下hNIS/潮酶素(hyg)基因共表达的重组逆转录病毒载体pSIRmAlbhNISIVSIREShyg。2、瞬时转染与荧光检测。脂质体法将pmAlb-Luc转染鼠肝癌细胞(MH3924A)、人未分化型甲状腺癌细胞(SW1736)、人乳腺癌细胞(MCF-7)和人大细胞肺癌细胞(LCLC-103H)后24小时检测萤虫素酶活性以评价mAlb的功能和组织特异性。3、稳定转染。脂质体法将pSIRmAlbhNISIVSIREShyg转染包装细胞EcoPake293,获取重组逆转录病毒颗粒感染鼠肝癌细胞(MH3924A),潮霉素筛选3周后建立NIS稳定表达细胞系。4、体外核素摄取和流出实验。体外培养条件下,评价重组肝癌细胞对125I或99mTc的摄取和流出情况及各种抑制剂对摄取和流出过程的影响。5、克隆形成实验。不同放射性浓度的131I作用下,计数克隆形成数目,评估131I对野生型和重组肝癌细胞的杀伤作用。6、移植瘤模型建立。ACI大鼠侧腹部接种野生型和/或重组肝癌细胞,待肿瘤长至直径0.6-1.0时用于核素生物分布和治疗研究,肿瘤长至直径1.0cm时用于核素显像研究。7、生物分布。研究不同给药模式下131I在荷瘤鼠体内的生物分布。8、核素显像。体内成瘤条件下,评价重组肿瘤细胞和野生型肿瘤细胞对131I、99mTc的摄取和流出情况。9、体内131I治疗实验。成瘤条件下定期观测肿瘤大小评价治疗剂量131I对肝癌细胞的杀伤作用。 结果: 1、酶切及序列测定证实萤虫素酶表达载体pmAlb-Luc和mAlb引导下hNIS/潮酶素共表达的重组逆转录病毒载体pSIRmAlbhNISIVSIREShyg构建成功。2、
【学位授予单位】:上海交通大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R735.7

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【参考文献】
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