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《上海交通大学》 2007年
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HGF与TGF-β在肾病患儿肾组织中的表达及分析

于冀洋  
【摘要】: 局灶节段性肾小球硬化(FSGS)是导致儿童及成人肾脏疾病持续进展至终末期肾衰最常见的原发性肾小球肾炎的病理类型之一[1]。临床表现多样,其肾脏病理表现会随疾病的进展出现全小球硬化,肾小管的萎缩和间质纤维化也逐渐增多呈弥漫性分布。如何阻断或延缓局灶节段性肾小球硬化疾病的进展特别是目前临床和基础研究的一个热点。 目前研究发现肾组织中有多种细胞因子与FSGS发生有关,依作用不同将加速FSGS发展的物质称为正向调控因子,代表物质如转化生长因子β(TGF-β),结缔组织生长因子(CTGF)等;将抑制FSGS发展的物质称为负向调控因子如肝细胞生长因子(HGF),骨形态发生蛋白(BMP)等。肝细胞生长因子和转化生长因子β是两种主要影响FSGS肾病发展的细胞因子,并且两者存在一定负向相关性。本实验以儿童肾组织为研究对象,通过免疫组化的方法,分析肝细胞生长因子和转化生长因子-β在FSGS肾病儿童肾组织当中的表达及两者的相互关系 研究目的 (1)肝细胞生长因子和转化生长因子β在薄基底膜肾病患儿肾组织中的表达。 (2)肝细胞生长因子和转化生长因子β在局灶节段性肾小球硬化肾病(肾间质未见病变和肾间质轻度纤维化)患儿的肾组织不同区域的表达。 (3)肝细胞生长因子和转化生长因子β与肾组织病变程度的关系。 (4)在FSGS肾病的儿童肾组织中肝细胞生长因子和转化生长因子β的关系。 研究方法 (1)实验组的选择 选择临床诊断为原发性肾病综合征同时肾组织病理诊断为局灶节段性肾小球硬化的患儿35例。(光镜下病变不明显者22例为实验组1,光镜下病变明显者13例为实验组2) (2)对照组的选择 选择符合临床诊断为孤立性血尿同时肾组织病理诊断为薄基底膜肾病(免疫荧光均阴性)的患儿26例 (3)儿童肾脏中细胞因子表达:采用免疫组化-SP法检测 滴加兔抗人肝细胞生长因子多克隆抗体(美国HLA公司1:150)或兔抗人转化生长因子β多克隆抗体(美国HLA公司1:200)。 (4)肾组织中的转化生长因子β和肝细胞生长因子表达的半定量分析 S1:应用显微镜观察细胞(×400)行单盲读片,以胞浆出现棕黄色染色为阳性信号,肾小球系膜区域随机选取10个高倍镜视野,肾小管间质区域随机选取10个高倍镜视野。 S2:采用IMS医学图像分析软件,测定所选切片中的HGF和TGF-β的阳性面积占每个分析视野总面积的比值和阳性强度值。 S3:两种因子的表达水平用免疫组化指数表示,免疫组化指数=阳性面积比×强度值。 (5)统计学处理: 测定结果用SPSS软件进行统计学处理,数据用x±s表示。组间均数的比较采用t检验(P0.05有统计学意义);组内数据比较采用组内数据检验采Pearson检验(P0.05有统计学意义,P0.01有显著统计学意义)。 研究结果 1.对照组(标本26例)肾组织中的HGF表达和TGF-β的表达 (1)HGF的表达:肾小球肾小管区域可见有少许淡棕黄色阳性表达。肾小球系膜区免疫组化指数为2.61±0.55,肾小管间质区免疫组化指数为3.29±0.47。 (2)TGF-β的表达:肾小管区域可见有少许淡棕黄色阳性表达,肾小球区少见。肾小球系膜区免疫组化指数为3.52±0.55.肾小管间质区免疫组化指数为2.81±0.65, 2.实验组(FSGS)患儿肾组织中HGF表达和TGF-β的表达。 2.1实验组1(22例)两种因子均可在肾组织中见明显棕黄色阳性表达 (1)HGF肾小球系膜区免疫组化指数为15.31±0.95,在肾小管肾间质区免疫组化指数为16.40±1.44。 (2)TGF-β肾小球系膜区免疫组化指数为16.78±0.83,肾小管间质区免疫组化指数为18.66±1.50。 2.2实验组2(13例)两种因子均可在肾组织中见棕黄色阳性表达。 (1)HGF肾小球系膜区免疫组化指数为14.91±1.37,肾小管肾间质区免疫组化指数为15.62±1.03。 (2)TGF-β肾小球系膜区免疫组化指数为19.38±1.39,肾小管间质区免疫组化指数为21.07±1.43。 结论 (1)HGF及TGF-β在实验组与对照组的肾小球系膜区和肾小管间质区上均有表达。 (2)与对照组相比,两个实验组出现肾脏病理改变同时HGF及TGF-β表达明显增高(P0.05)。 (3)与实验组1相比,实验组2肾组织中HGF的表达随肾脏病理表现加重呈下降趋势(P0.05),TGF-β的表达随肾脏病理表现加重增加明显(P0.05)。 (4)在实验组1和实验组2的肾小球系膜区及肾小管间质区HGF与TGF-β的表达呈负相关(r均为负值),且在肾小管间质区负向相关性更为明显(肾小管间质区P0.01)。
【学位授予单位】:上海交通大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R726.9

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