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《上海交通大学》 2008年
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小苍兰ISSR分子标记

周凌瑜  
【摘要】: 小苍兰作为世界十大切花之一,具有很高的观赏价值和经济效益。本文采用简单重复序列间(ISSR,inter-simple sequence repeat)分子标记对现有的12份小苍兰种质进行了研究,分析了其遗传多样性和亲缘关系,为后续的小苍兰育种工作和品种保护提供理论依据。 首先,优化了小苍兰的DNA提取方法。在改良CTAB法的基础上,将研磨粉碎的样品用dd-H2O水洗处理,同时在2XCTAB中加入0.0125mol/L的硼砂去除样品中的酚类物质。在加入酚/氯仿/异戊醇之前,在提取液中加入0.35体积无水乙醇;同时在加入2倍体积无水乙醇沉淀DNA之前,加入0.5体积5mol/L氯化钠和后续PS Erasol处理去除多糖类物质。DNA中混杂的RNA经RNase水解去除。利用优化的DNA提取方法,对比了从小苍兰不同部位提取的DNA质量,发现幼嫩叶片为最佳的取材部位。利用优化的提取方法,获得了适合ISSR分子标记的高质量小苍兰DNA,为下一步试验提供了材料。 其次,优化了小苍兰ISSR-PCR的反应体系。通过对比研究不同反应体积对PCR结果的影响,我们选择了25μL的反应体系。利用五因素四水平的正交试验,研究了镁离子浓度、dNTPs浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量和引物用量对ISSR-PCR的影响,建立了适合小苍兰的ISSR-PCR反应体系。在25μL的反应体系中含有1×Taq DNA酶配套缓冲液(10mmol/L Tris·HCl,pH值9.0,50mmol/L KCl,0.1% Triton X-100),2.0mmol/L MgCl2,0.06U/μL Taq DNA聚合酶,4ng/μL模板DNA,0.4μmol/L引物,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6mmol/L。同时,通过温度梯度PCR确定了各引物最适宜的退火温度。该优化体系的建立为下一步对小苍兰进行ISSR分子标记奠定了基础。 最后,利用优化的ISSR-PCR反应体系,对12份小苍兰种质进行了ISSR的分子标记研究。数据经NTSYSpc 2.1版分析处理,根据Nei’s遗传距离建立了12份不同花色小苍兰的聚类图和遗传距离图。根据聚类图可以将材料划分为4个类群:白色一组,大红重一组,黄色系和红色系一组,紫色系一组。从分子水平上说明这12份小苍兰种质的遗传背景相对比较简单,遗传基础比较窄。
【学位授予单位】:上海交通大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S682.29

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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2 李房英;黄彦晶;吴少华;赖钟雄;;三角梅ISSR反应体系的建立和优化[J];生物技术通报;2010年07期
3 李房英;黄彦晶;吴少华;;三角梅ISSR反应体系的建立和优化[J];海峡科学;2010年10期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 李房英;黄彦晶;吴少华;;三角梅ISSR反应体系的建立和优化[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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3 黄彦晶;三角梅(Bongainvillea Brasiliensis Raeusch.)种质资源的ISSR分析[D];福建农林大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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9 曹天旭;吴松权;廉美兰;朴炫春;;满天星基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化[J];北方园艺;2007年02期
10 彭海;张静;王博;陈禅友;;ISSR反应中空气污染及其预防[J];北方园艺;2007年09期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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8 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
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10 杨晨;徐凤花;单世华;刘宇;李春娟;张廷婷;闫彩霞;;花生子叶RNA提取方法比较与分析[J];山东农业科学;2011年01期
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1 倪中福;张义荣;梁荣奇;刘广田;孙其信;;分子标记与小麦遗传多样性评价研究[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
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3 魏昕;潘光堂;;墨白964群体5轮混合选择遗传变异的分子生物学研究[A];2004全国玉米种质扩增、改良、创新与分子育种学术会议论文集[C];2004年
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7 陈秀蓉;杨成德;贾迎春;;西瓜细菌性果斑病菌的分离鉴定[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
8 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
9 刘孟军;;基因组图谱及其在果树上的应用[A];中国科协第3届青年学术年会园艺学卫星会议暨中国园艺学会第2届青年学术讨论会论文集[C];1998年
10 宋婉;续九如;杨凯;贾继增;;AFLP技术在中国枣优良品种鉴定中的应用[A];首届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C];1998年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李秀霞;榛子杂交后代的遗传分析与良种选育研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
2 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
3 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
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7 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
8 秦伟;新疆野苹果繁育特性及种质资源亲缘关系研究[D];新疆农业大学;2010年
9 李培英;新疆草坪用野生偃麦草种质资源评价[D];新疆农业大学;2010年
10 石从广;油菜EMS诱变群体的构建以及油脂代谢相关基因等位多态性与油脂品质关系的研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘敏;基于SSR、ISSR和RAPD对大豆疫霉菌的遗传多样性研究[D];华中农业大学;2010年
2 潘慧;杏鲍菇优良杂交子的初步选育[D];华中农业大学;2010年
3 李良;湖北省油茶优良单株遗传多样性及品质初步分析[D];华中农业大学;2010年
4 王瑞文;紫薇开花生物学特性及杂交育种的初步研究[D];华中农业大学;2010年
5 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
6 罗杨;柑橘变异材料的遗传鉴定与品质分析[D];华中农业大学;2010年
7 孙明伟;基于SRAP标记的部分百合种及品种的遗传关系及亲和性分析[D];华中农业大学;2010年
8 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
9 郭一鸣;全球白菜型油菜遗传多样性分析[D];华中农业大学;2010年
10 董巍;分子标记辅助选择改良光温敏核不育系的稻瘟病抗性和稻瘟病抗性基因的初步定位[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 林映雪;孙伟生;;三角梅栽培技术及其在园林中的应用[J];安徽农学通报;2008年03期
2 李延龙;张明;曹秀敏;胡青坡;乔宝健;;ISSR分子标记技术在金叶女贞品种鉴定中的应用[J];安徽农学通报;2008年22期
3 张其安,方凌,董言香,廖华俊,方庆礼,卢汪友;普通丝瓜品种的熟性研究[J];安徽农业科学;2000年01期
4 高军红;11个丝瓜杂交组合主要性状的比较试验[J];安徽农业科学;2003年01期
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8 刘桂智,刘微,宋士清,高书国;丝瓜的药用价值[J];北方园艺;2003年03期
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10 褚云霞;汤庚国;张永春;靖相密;;蜡梅ISSR反应体系的优化[J];北方园艺;2007年10期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 刘云国;三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学研究[D];中国海洋大学;2005年
2 张文静;微卫星DNA及ISSR技术在原生动物中的应用研究[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2006年
3 袁万安;法医鱼类学种属鉴别初步研究[D];四川大学;2006年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王希道;不同鳗鱼种群遗传结构和种质鉴定分子遗传标记研究[D];南京农业大学;2000年
2 谢文军;不同类型丝瓜杂种优势及性状遗传特性的研究[D];山东农业大学;2003年
3 杨慧荣;用RAPD技术研究几种鲷科鱼类的遗传变异和系统进化[D];华中农业大学;2003年
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10 姜福星;百合种质资源遗传多样性ISSR研究[D];南京林业大学;2006年
【二级引证文献】
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1 蹇黎;;ISSR和SRAP标记技术在葫芦科植物种质资源研究中的应用[J];长江蔬菜;2012年02期
2 张红梅;邵元华;龙甜甜;项艳;王进;汤锋;;多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计[J];安徽农业大学学报;2012年03期
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 蒲小龙;葡萄(Vitis L.)种质资源的ISSR分析[D];福建农林大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张治国;青岛百合(Lilium tsingtauense)复合种群研究[D];华东师范大学;2002年
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中国硕士学位论文全文数据库 前4条
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3 朱红霞;牡丹、芍药品种DNA指纹图谱绘制的初步研究[D];北京林业大学;2004年
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4 马琴;曹瑞;陈安平;;中药肉苁蓉遗传多样性的ISSR研究[A];第六届肉苁蓉暨沙生药用植物学术研讨会论文集[C];2011年
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6 张林;成海钟;周玉珍;娄晓鸣;吕文涛;张文婧;;62个朱顶红品种ISSR遗传多样性分析[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
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9 李玲;黄峥;许正;羊海军;崔大方;;中国天山野樱桃李(Prunus divaricata Ldb.)遗传多样性的ISSR分析[A];2011年全国系统与进化植物学暨第十届青年学术研讨会论文集[C];2011年
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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3 本报实习记者 刘文娟;“福农”小苍兰种球繁育结硕果[N];中国花卉报;2009年
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9 本报记者 寇亚琴;农户种花看“老万”[N];中国花卉报;2006年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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7 张桂寅;棉花黄萎病抗性表现及其基因表达的研究[D];河北农业大学;2005年
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10 薛建华;黑龙江流域野生莲的遗传多样性[D];东北林业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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4 王鹤冰;人工老化芥菜种子生理生化变化及基因组DNA损伤的ISSR研究[D];西南大学;2010年
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6 宋吉轩;贵州甘薯种质资源鉴定与ISSR遗传多样性分析[D];西南大学;2010年
7 周少云;华南地区狗牙根遗传多样性的形态与ISSR研究[D];海南大学;2010年
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