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《上海交通大学》 2008年
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膀胱肿瘤干细胞样SP细胞的分选及鉴定

黄盛松  
【摘要】: 目的:探索膀胱癌干细胞样SP细胞的分选方法,并分析其生物学特性。 方法:以流式细胞术对DNA染料hoechst33342染色后的人膀胱鳞癌细胞系SCaBER;人膀胱移行细胞癌细胞系T24、5637、Biu-87、EJ等5种膀胱癌细胞系进行检测,分选其中的SP细胞(side population,SP)及non-SP细胞。在电子荧光显微镜下进行形态学观察,并将培养后的SP细胞及non-SP细胞再次经流式细胞仪分析验证;同时将SP细胞、non-SP细胞以1×104及1×105细胞数分别接种至NOD/SCID小鼠皮下建立人膀胱癌NOD/SCID鼠移植瘤模型;MTT法分析丝裂霉素C(0.05mg/ml、0.10 mg/ml、0.50 mg/ml)对SP细胞、non-SP细胞以及未分选SCaBER细胞的抑制作用。 结果:所检测的SCaBER、T24、5637、Biu-87、EJ等5种膀胱癌细胞系中,仅在膀胱鳞癌细胞系SCaBER中发现SP细胞,分选出的SP细胞占SCaBER总细胞数的0.6%。电子荧光显微镜下观察,SP细胞体积较non-SP细胞小,SP细胞胞核蓝色荧光暗淡或消失。FCM分析发现培养后的SP细胞能分化为SP细胞及non-SP细胞;1×104细胞数条件下各种细胞均未成瘤,1×105细胞数注射NOD/SCID鼠SP细胞成瘤率为67%,non-SP细胞未生成肿瘤;SP细胞能外排荧光染料,0.05 mg/ml丝裂霉素C对SP细胞的抑制率为(56.61±4.16)%,低于non-SP细胞(60.25±2.52)%及未分选细胞(61.42±2.33)%,差异有统计学意义(P 0.05)。 结论:本研究分选的SP细胞中可能含有大量干细胞样肿瘤细胞,对化疗药物具有一定的耐受性,可为膀胱癌干细胞研究提供一定的基础。
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