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《上海交通大学》 2008年
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Sp1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3细胞增殖和Ⅰ型胶原基因表达

张世新  
【摘要】: 目的研究针对转录因子Sp1的圈套寡脱氧核苷酸(decoy Oligo- deoxynucleotide,decoy ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)细胞增殖和Ⅰ型胶原前α1、α2基因表达的影响,探讨病理性疤痕的基因治疗。 方法体外设计合成针对转录因子Sp1的特异性哑铃形decoy ODN。用阳离子转染试剂JetPEI将ODN转染入NIH3T3细胞。分别用流式细胞仪检测ODN转染效率,激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布,电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证ODN与Sp1的特异性结合。用WST-8检测ODN对细胞增殖的影响。用半定量PCR和荧光定量PCR检测ODN对细胞Ⅰ型胶原前α1、α2基因表达的抑制作用。 结果转染试剂JetPEI可将哑铃形Sp1 decoy ODN高效转染进入NIH3T3细胞,转染效率达99.24%;激光共聚焦显微镜显示进入细胞的ODN呈现明显的时空分布,在转染后12h,Sp1 decoy ODN几乎全部进入细胞核内;EMSA实验证明Sp1 decoy ODN能与蛋白特异性结合;转染100nM Sp1 decoy ODN可抑制细胞生长,与空白对照组相比,差异有统计学意义(p0.05),对细胞增殖的抑制效果在第二天、第三天最明显,抑制率分别为55%、41%;转染100nM Sp1 decoy ODN,24h后,可同时抑制Ⅰ型胶原前α1、α2 mRNA的表达,抑制效果分别为26%、34%(p0.05)。 结论哑铃形decoy ODN可以通过拮抗核转录因子Sp1的活性而抑制NIH3T3细胞的增殖和Ⅰ型胶原基因的表达。
【学位授予单位】:上海交通大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R622

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