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《华东理工大学》 2011年
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必特螺旋霉素组分的高速逆流色谱分离研究

顾芨芨  
【摘要】:必特螺旋霉素是由转基因的螺旋霉素产生菌发酵得到的新型抗生素,与螺旋霉素相比具有更好的抗菌性能。必特螺旋霉素成品的主要抗菌组分是异戊酰螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,因此,分离制备这三种组分对于药物分析和药理研究具有重要意义。 由于必特螺旋霉素的组分复杂且结构、理化性质差别小,因此对其主要组分的分离制备需要一种高分辨、高效率的分离方法。高速逆流色谱是一种基于液-液分配原理的新型分离技术,可达到几千级理论塔板数的分离效果,且具有进样量大、高效快速等优点,为异戊酰螺旋霉素的分离制备提供了手段。本文主要研究用高速逆流色谱分离必特螺旋霉素成品,制备异戊酰螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。 首先,溶剂体系的选择是高速逆流色谱分离的关键,而目标物在溶剂体系两相中的分配系数是其主要依据之一。本文通过高效液相色谱法测定了不同比例溶剂体系中异戊酰螺旋霉素的分配系数和体系分层时间,得到五个适合高速逆流色谱分离的溶剂体系。以其中的正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水体积比10:1:5:7这一体系为例,进一步考察了温度、pH对分配系数和分层时间的影响。 将筛选获得的五个溶剂体系初步应用于异戊酰螺旋霉素的半制备型(螺旋管体积300mL)高速逆流色谱分离,通过考察分离获得产品的纯度、收率,得出具有最佳分离效果的体系是正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水体积比10:1:5:7。在选择了溶剂体系的基础上,进一步对流速、接峰时间、进样量等操作条件进行了优化,得到最佳的色谱条件为采用梯度洗脱,进样量125mg。分离得到异戊酰螺旋霉素Ⅱ、Ⅲ的纯度最高可达98.1%、99.1%,异戊酰螺旋霉素Ⅰ的纯度为40%左右,可用于进一步分离纯化。 依据半制备型高速逆流色谱分离的实验结果,用制备型(螺旋管体积1000mL)高速逆流色谱对戊酰螺旋霉素Ⅱ、Ⅲ进行分离制备,并采用更换流动相的梯度洗脱方法提高分离效率。进样量400mg的条件下,分离可得异戊酰螺旋霉素Ⅱ约40mg,纯度在90%以上;异戊酰螺旋霉素Ⅲ约50mg,纯度在97%以上。对获得的产品进行质谱分析,并测定了其干粉效价,获得异戊酰螺旋霉素Ⅱ和异戊酰螺旋霉素Ⅲ的溶液质量浓度—色谱峰面积标准曲线,为药物质量控制提供了一定的参考。
【学位授予单位】:华东理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:TQ465

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【参考文献】
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