苦瓜降糖多肽的研究

张文姬

【摘要】：糖尿病是世界上危害人类健康最严重且最常见的内分泌疾病之一。目前存在着糖尿病治疗的化学类药物毒副作用大这一难题。基于市场对安全、方便、有效的降血糖药物的迫切需要,本实验通过生物工程技术研究药用植物苦瓜中具有降血糖活性的多肽。论文研究内容之一：根据已知苦瓜降糖多肽P的蛋白序列和大肠杆菌的密码子偏爱性,经反向翻译后得到长度为498bp的核苷酸序列,以此设计多段寡核苷酸片段,通过PCR体外拼装此基因,转化E.coli BL21(DE3)表达并对表达条件进行优化。经Ni2+-NTA纯化后测定其对四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠的降糖活性。成功地以体外基因拼装的方法得到了降糖多肽P基因,重组蛋白获得可溶性表达且纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。动物药理实验证明其对四氧嘧啶引起的糖尿病确实具有降糖活性。体外基因拼装法是一种有效获取目的基因的方法,可进行密码子偏爱性设计在宿主系统中有效表达。论文研究内容之二：由于小分子肽在表达时易被宿主蛋白酶降解,因此将多肽基因串联表达,并对表达条件进行优化,不仅可以提高目标蛋白表达的稳定性,并希望提高表达量。成功表达出串联了10个降血糖活性多肽的蛋白,经Ni2+-NTA亲和柱纯化后纯度达到90%以上,尝试优化酸解条件,得到降血糖活性多肽单体。为降血糖活性多肽的生产提供一条技术途径。

【关键词】：苦瓜 降血糖活性多肽 体外拼装 串联表达 酸解蛋白
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：S642.5
【目录】：

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6	记者王军;永济中农举办多肽尿素推介会[N];农资导报;2009年
7	王维亮;“多肽蛋白脂质体”开发前景广阔[N];中国食品报;2009年
8	记者李松;全国最大多肽产业园竣工[N];中国食品报;2010年
9	孙全;功能多肽在食品中的应用[N];中国食品质量报;2007年
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