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《华东理工大学》 2012年
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里氏木霉中表达质粒的构建及中性纤维素酶基因的表达

吕丹丹  
【摘要】:丝状真菌里氏木霉是一种重要的纤维素酶生产菌株。里氏木霉产生的纤维素酶包括内切葡萄糖苷酶(EG)、纤维二糖水解酶(CBH)和p-葡萄糖苷酶(CB),已经通过基因工程的手段来改变里氏木霉中纤维素酶的组分和提高纤维素酶的产量。里氏木霉的基因工程突变株的纤维素酶分泌蛋白量接近40 g/L,并且纤维二糖水解酶Ⅰ的分泌蛋白量占总分泌蛋白的50%。因此,cbhl启动子被认为是里氏木霉中最强的启动子。除此之外,里氏木霉本身是无毒的,即使产酶达到高峰,里氏木霉也不会产生细胞毒素和抗生素。因此,在里氏木霉中使用cbhl启动子和终止子构建表达载体来生产同源或是异源蛋白是非常理想的。 在本研究中使用强启动子cbhl构建了两个二元质粒:随机插入型质粒pWEF31和同源重组型质粒pWEF32。pWEF31和pWEF32都包括潮霉素B磷酸转移酶表达盒,cbhl的启动子和终止子。通过构建二元表达质粒pWEF31-red和pWEF32-red,检测红色荧光蛋白在里氏木霉中的表达来证明pWEF31和pWEF32的实用性。 在我们实验中,使用pWEF31将红色荧光蛋白基因整合进里氏木霉基因组中来分析诱导表达中产酶与红色荧光蛋白表达的关系。此外,使用pWEF31将两种中性纤维素酶基因整合到里氏木霉基因组中,导致纤维素酶酶活的pH从4.8向6.0偏移。
【学位授予单位】:华东理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:TQ925

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【参考文献】
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