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《华东理工大学》 2018年
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人羊膜间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞共培养制备内皮化骨微组织

周敏  
【摘要】:基于微构重塑技术可制备活性好、细胞分布均匀的厘米级大型组织,但该组织移植至体内依然将面临传质限制问题,组织预血管化是克服这一限制的有效方法。为制备可构建大型预血管化骨组织的模块组织,本研究首先在二维条件下考察适宜人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养的生长培养基和成骨诱导培养基,并分别在两种培养基中以不同细胞比例共培养,考察HUVECs及两种细胞的相对比例对血管样结构的形成、hAMSCs成骨分化等方面的影响。在二维共培养研究结果的基础上,本研究以微载体为支架材料,考察hAMSCs和HUVECs在转瓶中三维动态共培养制备内皮化骨微组织的可行性,并考察HUVECs接种时间对内皮化骨微组织的活性、成骨特性及成血管能力的影响。结果表明,hAMSCs和HUVECs在生长培养基及成骨诱导培养基中二维共培养均能形成血管样结构,且HUVECs的密度越高,血管样结构形成越快,但消失也越快,hAMSCS相对密度较高时血管样结构相对稳定。在成骨分化方面,HUVECs的密度较高时不利于hAMSCs的成骨分化,HUVECs密度较低时hAMSCs成骨分化几乎不受影响。hAMSCs和HUVECs的比例为1:1时对血管形成和稳定以及成骨分化等最有利。hAMSCs和HUVECs经过两段式三维共培养所得的微组织具有较高活性,同时具有成血管功能和成骨特性,但与hAMSCs单独培养的微组织相比,其成骨特征相对较弱。此外,HUVECs对hAMSCs成骨分化的作用与其所处的分化状态有关,HUVECs在成骨诱导培养期接种有利于hAMSCs的成骨分化,其中HUVECs在hAMSCs成骨诱导7天后接种将显著提高骨微组织的成骨分化水平。因此,利用三维共培养的方法可制备活性高且具有成骨分化及成血管能力的内皮化骨微组织,为进一步制备大型血管化骨组织奠定基础。
【学位授予单位】:华东理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R329.2

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