收藏本站
《东华大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

多氯联苯类环境激素的实时定量免疫PCR检测方法研究

陈寒玉  
【摘要】:环境激素是一类会使人类及生物的内分泌系统发生紊乱的外来物质,它可以影响人类和生物的内分泌系统,导致生殖、发育和行为异常。多氯联苯类化学物质曾被作为优质工业添加剂,大量使用在石油产品、塑料、农药加工等行业。但毒理学研究表明,此类物质具有环境激素的特征,具有一定的致癌性和影响动物体的生殖和发育系统。 当今存在的多氯联苯污染物,一部分是由于上世纪遗留下来的,另一部分是由新的污染源产生。由于多氯联苯分子结构的稳定性,使它不易被自然降解和消除,因此,如今在世界的各个地方几乎都能找到它的踪迹,成为一类普遍的环境污染物。多个国家都把它列为优先检测污染物并作为环境监测必检项目,并以严格的排放标准限制它的污染源排放。 当前,环境中多氯联苯的检测方法主要有气相色谱、液相色谱和气质联用等色谱分析技术。但色谱技术需要复杂的前处理技术和昂贵的仪器,对操作人员的技术要求也比较高,因此不适于大规模环境样品的现场监测和批量监测。免疫分析技术具有方便快捷、检测成本低、灵敏度高等优点,可以满足简单、快速、灵敏检测环境激素的要求。目前已经有以ELISA为主的多种多氯联苯免疫监测方法,如分子传感器,表面细胞质团共振检测(SPR)等。 免疫PCR是1992年由Sano首次提出的,它将体系完善的ELISA分析方法和具有强大信号放大能力的PCR技术结合起来。大量的应用研究表明,该方法与ELISA相比不仅具有很好的一致性而且灵敏度更高,线性范围更广,具有更强的检测能力。免疫PCR在技术和信号检测仪器上的进一步发展,导致了实时定量免疫PCR技术(rt-IPCR)的产生。 实时荧光定量免疫PCR是近年来在荧光PCR和免疫PCR基础上建立起来的一种免疫检测新技术。此方法建立以来,已经在癌症、自身免疫缺陷、致病菌和细菌毒性等生物学和医学研究领域得到广泛应用,但是还没有见到有应用在多氯联苯污染物检测方面的报道。该技术和一般免疫PCR与传统的ELISA相比,具有更小的实验室内部误差和更高的灵敏度。因此本论文意在把该技术引入环境学研究领域,建立一种灵敏度更好的检测多氯联苯类环境污染物的新方法,为痕量有机污染物的检测提供一个新思路,对环境中多氯联苯的迁移、转化和降解等环境行为的调查研究提供一种新的检测方法。 本文以多氯联苯类环境激素作为检测对象,选择出三种有代表性的多氯联苯单体,根据免疫检测的技术要求,主要通过半抗原衍生物的设计和制备、全抗原和抗体的制备与表征,采用荧光免疫PCR技术,分别建立了三种多氯联苯类环境激素的免疫检测新方法,并应用于实际样品的测定。课题的主要研究内容为: 1.多氯联苯单体的合成方法研究:通过联苯胺还原法和改性Gomberg不对称合成法,制备出四种多氯联苯单体,产物通过红外色谱和元素分析进行了表征。通过对三种多氯联苯单体的合成,确立了一种Gomberg不对称合成多氯联苯新方法。 2.多氯联苯单体半抗原的合成:通过Friedel-Crafts酰基化反应,在三种多氯联苯分子上引入羧基,合成了PCB12, PCB37, PCB77三种多氯联苯的半抗原衍生物。半抗原的分子结构和化学组成通过了~1H-NMR、IR和元素分析进行表征和确证。 3.免疫原的制备:用活化酯法分别将三种半抗原与牛血清蛋白(BSA)偶联,制得PCBs的免疫原;用混合酸酐法将半抗原分别与卵清蛋白(OVA)偶联,制得PCBs的包被原。产物经紫外光谱、蛋白质含量测定等方法给予确证。 4.多克隆抗体的制备:通过免疫新西兰大白兔,对血清进行分离和提纯,制备了三种效价高、特异性好的抗多氯联苯类环境激素的新抗体IgG;琼脂双向扩散实验表明PCB12,37,77的抗体效价分别为:1:32,1:32,1:64。 5.生物素化探针DNA的制备和纯化:探针DNA是以pUC19质粒为模板扩增得到的一段103个碱基对的生物素化DNA。根据DNA扩增试剂盒的说明,在PCR扩增体系中加入各种反应物,包括两条生物素化了的引物。引物序列分别是:上游引物序列从5’到3’是G TAA AAC GAC GGC CAG T,下游引物的序列从5’到3’是CAG GAA ACA GCT ATG AC。PCR扩增的程序是:940C预变性4 min。然后是30个循环反应,每个循环的程序是94℃变性20s,55℃退火20s,72℃延伸20s。30个循环反应后在72℃保持3 min,使延伸完全。使用UNIQ-10 PCR纯化试剂盒,对PCR扩增产物进行纯化后,再用琼脂糖凝胶电泳后染色进行定性,并用紫外分光光度法定量检测分析。 6.生物素化抗体和半抗原的制备:通过活化生物素法,使三种抗体与活化生物素(BNHS)进行偶联,产物经过透析纯化后,得到三种PCBs的特异性生物素化抗体;把活化生物素(BNHS)通过混合酸酐法与三种多氯联苯半抗原衍生物进行合成反应,得到了三种生物素化半抗原。产物经紫外光谱、蛋白质含量测定等方法给予确证; 7.建立了间接竞争实时定量免疫聚合酶链式反应(间接竞争rt-IPCR)分析方法,用于检测环境中三种PCBs。用制备的包被原包被经过戊二醛处理的PCR小管,接着用PCBs与包被原竞争结合特异性抗体,再利用生物素化二抗与结合在包被原上的特异性抗体结合,然后通过亲和素与制备的生物素化的103bp探针DNA结合,最后通过实时定量PCR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时检测。此方法对PCB12, PCB37, PCB77测定的标准曲线相关系数分别为:0.941,0.961,0.954。对三种多氯联苯的检测限分别达到1.75、1.32和1.50 fg/mL。 8.建立了直接竞争实时定量免疫聚合酶链式反应(直接竞争rt-IPCR)分析方法,用于检测环境中三种PCBs。用制备的包被原包被经过戊二醛处理的PCR小管,接着用PCBs与包被原直接竞争结合生物素化特异性抗体,然后通过亲和素与制备的生物素化的DNA探针结合,最后通过实时定量PCR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时检测。此方法对PCB12, PCB37, PCB77测定的标准曲线相关系数分别为:0.987,0.988,0.985。对三种多氯联苯的检测限分别达到1.53、1.42和1.25 fg/mL。 9.建立了抗体包被实时定量免疫聚合酶链式反应(抗体包被rt-IPCR)分析方法,用于检测环境中三种PCBs。用制备的特异性抗体包被经过戊二醛处理的PCR小管,接着用PCBs与生物素化半抗原竞争结合特异性抗体,然后通过亲和素与制备的生物素化的DNA探针结合,最后通过实时定量PCR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时检测。此方法对PCB12, PCB37, PCB77测定的标准曲线相关系数分别为:0.966,0.971,0.985。对三种多氯联苯的检测限分别达到1.75、1.45和1.33fg/mL。 比较这三种方法可知,间接竞争rt-IPCR的检测灵敏度和工作曲线的相关性略低于其它两种方法。直接竞争rt-IPCR和抗体包被rt-IPCR均有较好的工作曲线相关性。通过对检测过程各步的优化发现,当采用0.8%的戊二醛溶液处理聚丙烯PCR管后,可以提高对抗原抗体的吸附能力,同时各种包被介质和包被时间、最佳抗原抗体结合浓度,包被液和封闭液、以及亲和素和生物素化DNA探针的浓度被优化,这些优化措施提高了检测的准确性。方法的特异性、回收率也被加以研究,并应用于实际土壤和污泥等环境样品的检测。结果表明,各种方法的交叉反应率小于15%,回收率在85~110%之间,样品的检测结果与GC/MS法的测定结果相比,具有良好的一致性。本论文建立的三种检测多氯联苯rt-IPCR方法均未见文献报道。
【学位授予单位】:东华大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:X830

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张建清,李敬光,吴永宁,姜杰,蒋友胜,周健;同位素稀释的气相色谱/高分辨质谱联用测定食品中二噁英和共平面多氯联苯[J];分析化学;2005年03期
2 庞华;标记免疫分析技术及其进展[J];国外医学.放射医学核医学分册;2002年05期
3 乔生军,吴自荣,戚蓓静,王林发;一种新型免疫PCR基因探针的构建及其在诊断中的初步研究[J];中国科学C辑;1998年01期
4 陈静生,高学民,QIMinJessicaBlunt;我国东部河流沉积物中的多氯联苯[J];环境科学学报;1999年06期
5 蒋可,陈荣莉;变电站多氯联苯污染源的治理[J];环境科学;1989年05期
6 安琼;董元华;王辉;陈芳;张劲强;;长江三角洲典型地区农田土壤中多氯联苯残留状况[J];环境科学;2006年03期
7 王文君,任军,陈克飞,丁能水,黄路生;聚合酶链式反应技术的研究进展[J];江西农业大学学报;2000年04期
8 邓安平;;酶联免疫吸附分析法测定苯并(a)芘和多氯联苯[J];环境化学;2006年03期
9 李凤,刘世贵;分子生物学技术在环境微生物研究中的应用[J];世界科技研究与发展;2003年04期
10 李敬光,赵云峰,吴永宁;离子阱串联质谱法检测鱼肉中指示性多氯联苯[J];分析化学;2005年09期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王升吉,杨崇良,尚佑芬,马立平,孙红炜,张友军;免疫分析法在农药残留检测中的应用及前景[J];山东农业科学;2005年04期
2 高军;骆永明;;多氯联苯(PCBs)污染土壤生物修复的研究进展[J];安徽农业科学;2005年11期
3 刘佳斌;苏炜;王金胜;;万寿菊根部生物碱类提取物抑菌活性成分的研究[J];安徽农业科学;2007年03期
4 朱骏;C-反应蛋白的测定及临床意义[J];安徽卫生职业技术学院学报;2003年04期
5 李荔,陈伯权;抗肾综合征出血热病毒和抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体的建立[J];病毒学报;1989年04期
6 宋淑敏,张成良,阚晓枫,陈京,胡伟贞,张作芳,由雪娟;南方菜豆花叶病毒单克隆抗体的初步研究[J];病毒学报;1991年02期
7 仲飞,李秀锦,王辛中,刘维全,齐顺章;腺病毒介导的猪生长激素cDNA在大鼠体内的诱导表达及其促生长作用的研究[J];病毒学报;2003年02期
8 谭苹;杨建明;肖瑞芬;张艳;;紫红链霉菌对钉螺酶组织化学的影响[J];动物学报;2006年01期
9 路小龙,张凤英,郭振泉,黄仪秀,朱圣庚;从噬菌体抗体库中淘选人绒毛膜促性腺激素的单链抗体[J];北京大学学报(自然科学版);2002年02期
10 王重庆,关迎辉,李启靖;导入蓖麻毒蛋白的供体淋巴细胞在小鼠皮肤移植中产生的特异免疫耐受[J];北京大学学报(自然科学版);1997年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高志贤;王艳;房彦军;周焕英;王涛;王红勇;;检测阿特拉津和罂粟碱的蛋白芯片技术研究[A];恶臭污染测试与控制技术——全国首届恶臭污染测试与控制技术研讨会论文集[C];2003年
2 吴明媛;;多氯联苯的性质、危害及在环境中的迁移[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
3 张建清;周健;蒋友胜;方道奎;姜杰;黄薇;张锦周;李慧;王舟;;我国某城市市售食品中PCBs污染现状调查研究[A];持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集[C];2007年
4 贺新怀;席孝贤;杨晓航;叶峥嵘;;千佛菌对肺癌小鼠免疫网络影响及抑瘤作用的实验研究[A];第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编[C];2006年
5 杨鸢劼;陈辉;;酶联免疫吸附法快速检测鳗弧菌[A];可持续水产养殖——资源、环境、质量——2003水产科技论坛论文集[C];2003年
6 李红莉;高虹;徐晓琳;高连存;李国刚;宫正宇;;我国水生生态系统中环境优先有机污染物的污染及研究现状[A];山东环境科学学会2002年度学术论文集[C];2003年
7 王宏伟;郭立格;林瑞年;杨丽坤;高峰;赵建华;;水中多氯联苯对生物的影响[A];中国动物学会北方七省市动物学会学术研讨会论文集[C];2005年
8 郑会芬;陈连康;卢东铭;;单克隆抗A、抗B抗体简易提纯、际酶及100例检案应用[A];首届中国法医物证学术交流会论文汇编[C];1993年
9 周伟;祝家镇;徐小虎;;双重免疫酶标染色法在法医病理中的应用[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
10 陈亚明;张光明;王慧;;超声波处理水中对二氯苯实验研究[A];中国化学会第七届水处理化学大会暨学术研讨会会议论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 童德文;苦马豆素—BSA的合成及其免疫原性研究[D];西北农林科技大学;2000年
2 于威;人血小板因子4在家蚕细胞和幼虫体内的表达[D];浙江大学;2001年
3 张祖麟;河口流域有机农药污染物的环境行为及其风险影响评价[D];厦门大学;2001年
4 沈立荣;中华蜜蜂、意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2和透明质酸酶基因的克隆与表达[D];浙江大学;2002年
5 蒋军喜;玉米矮花叶病病原鉴定、检测及外壳蛋白基因变异研究[D];浙江大学;2002年
6 屈树新;磷酸钙生物陶瓷骨诱导过程的早期细胞分化和骨特征蛋白表达研究[D];四川大学;2002年
7 王勤;特异性免疫吸附柱及CRRT清除血浆TNF-α的实验和临床研究[D];第三军医大学;2002年
8 张素方;蜜蜂和胡蜂蜂毒明肽、镇静肽、肥大细胞脱粒肽和过敏原抗原5基因的克隆与表达[D];浙江大学;2003年
9 姚斌;控制条件下除草剂在土壤中的降解及其对土壤生物学指标的影响[D];浙江大学;2003年
10 赵炜;痛块消巴布剂制剂工艺及治疗癌痛的临床和机理研究[D];北京中医药大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王克强;辽河水体系中多氯有机化合物(PCOCs)的调查和风险评价[D];大连理工大学;2000年
2 王永刚;LEPTIN单克隆抗体的制备及其应用性探索[D];上海医药工业研究院;2000年
3 朱振洪;人内皮抑素在家蚕培养细胞和幼虫中表达的研究[D];浙江大学;2001年
4 夏学春;人乙肝前表面抗原preS1和重组表面抗原SS1在家蚕中的表达[D];浙江大学;2001年
5 杜成辉;肿瘤坏死因子受体在多器官衰竭中的表达与基因调控[D];第二军医大学;2001年
6 周兰香;SMD人工抗原的制备研究[D];扬州大学;2001年
7 郭金平;甘薯抗线虫病基因的分子检测[D];福建农林大学;2001年
8 高玉龙;羊泰勒虫裂殖子蛋白分析及其ELISA诊断方法的建立[D];西北农林科技大学;2001年
9 朱优峰;甲磺隆除草剂的测定方法及其在矿物和土壤中的吸附机理研究[D];浙江大学;2001年
10 侯小凤;沿海农业区施用农药的环境经济损益分析——方法与案例研究[D];厦门大学;2001年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 凌伟,沈茜,王靖,徐玉莲,许育;免疫-PCR法检测柯萨奇病毒B组抗原的实验研究[J];第二军医大学学报;2001年03期
2 赵传鹏;浦跃朴;尹立红;梁戈玉;吕锡武;李先宁;;实时荧光定量PCR法检测环境假单胞菌属细菌丰度[J];东南大学学报(自然科学版);2006年01期
3 潘耀谦,金春彬;聚合酶链反应(PCR)技术体系研究进展[J];动物医学进展;1999年04期
4 余宇燕;沙玫;张淑玲;庄惠生;;流动注射化学发光法测定茶饮料中的茶多酚[J];分析试验室;2006年04期
5 庞华;标记免疫分析技术及其进展[J];国外医学.放射医学核医学分册;2002年05期
6 王刚垛;农药免疫分析方法进展[J];国外医学.卫生学分册;1998年05期
7 李金花,庄惠生;环境中荷尔蒙类化合物2,4-二氯苯酚的紫外光谱法研究及应用[J];工业水处理;2004年05期
8 蒋可,康致泉,边雅明;环境中多氯联苯残留物的色谱/质谱测定——o,p′DDE内标法[J];环境化学;1984年03期
9 李敏学,岳贵春,高福民,杜尧国;第二松花江中PCBs与有机氯农药的迁移和分布[J];环境化学;1989年02期
10 贾崇荣,邱月明,俞惟乐;多维气相色谱分离TCDDs和PCBs[J];环境化学;1992年02期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 汤桦;陈大舟;邵明武;戴新华;王覃;;加速溶剂萃取-气相色谱-质谱法分析土壤中多氯联苯[A];中国质谱学会第七届会员代表大会暨学术报告会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张美玲;两种肠道疾病中肠道菌群结构变化的分子生态学研究[D];上海交通大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 金大智;运用实时荧光PCR和DNA芯片技术检测和鉴定食源性致病菌方法的研究[D];辽宁师范大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘纯杰,杨瑞馥,刘明远,潘耀谦,苏维萍,周志江,王承宇,郑明光,李普霖;应用通用引物PCR法检测葡萄球菌A、D和E型肠毒素基因[J];山东食品科技;1994年04期
2 江树勋;吴圣静;李寿崧;饶静静;江云;;PCR检测沙门氏菌invA基因的灵敏度[J];食品科技;2006年10期
3 刘胜贵;魏麟;;应用PCR技术检测猪肉中沙门氏菌的研究[J];食品科学;2007年03期
4 赵志宏;李小明;廖德祥;邓嫔;李旭;;ANAMMOX菌的微生物学研究进展[J];微生物学通报;2007年01期
5 毛钧;蔡青;李文凤;黄应昆;;PCR技术在甘蔗宿根矮化病检测中的应用[J];甘蔗糖业;2008年02期
6 刘志培,杨惠芳;微生物分子生态学进展[综述][J];应用与环境生物学报;1999年S1期
7 沈浩,刘登义;遗传多样性概述[J];生物学杂志;2001年03期
8 张媛媛;刘均洪;;全基因组扩增的应用及进展[J];杭州化工;2003年02期
9 胡哲;王振国;刘金华;蔡阳;肖成蕊;王伟利;徐宝梁;;利用PCR技术检测鸡肉产品中的空肠弯曲杆菌[J];吉林农业大学学报;2005年06期
10 江燕;;PCR技术在转基因食品检测中应用[J];粮食与油脂;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谭诗文;余波;冉懋韬;蔡一鸣;艾玉萍;王璇;张华;;牛源HBV套式PCR方法建立及其S靶基因同源性分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
2 王平;王辉;许文兵;朱元珏;;肺组织结核分枝杆菌巢式PCR快速检测[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
3 回文广;赵廷昌;孙福在;张卉;王建荣;高孝强;田丽;;实时荧光定量PCR原理及其应用[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
4 张太翔;凌宗帅;徐彪;梁成珠;朱来华;孙军;王洪兵;;实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
5 吴驰;张红梅;詹能勇;邓永聪;单万水;余卫业;;荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
6 周素娟;张铁军;何纳;;HCV的C/E1区PCR扩增方法的改进[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
7 李青;钟青萍;王丽;;海产品中副溶血弧菌的PCR快速检测方法的建立[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
8 陈信忠;任聪;龚艳清;王寿昆;;实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
9 潘康成;冯兴;崔恒敏;张亚兰;赵爽;;实时荧光定量PCR检测鸡口服枯草芽孢杆菌后肠道芽孢杆菌数量变化[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
10 孙秋影;卢长春;魏强;庞淑芬;;LightCycler 480实时荧光定量PCR仪在献血者血液筛查中的应用[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 通文;Bio—Rad公司推出快速定量PCR反应液[N];中国医药报;2008年
2 通言;ABI实时定量PCR仪获准与rRT—PCR Flu Panel联用[N];中国医药报;2008年
3 郭伟立;实时、个体、高效[N];中国医药报;2011年
4 张洁;壳聚糖拓展制剂应用空间[N];中国医药报;2006年
5 记者 瞿剑;猪是否“感冒”五小时见分晓[N];科技日报;2009年
6 《金周刊》记者 朱杰;罗氏为何青睐深圳匹基[N];中国经营报;2001年
7 《金周刊》记者 朱杰 新华社记者 王璐;记者调查广州达安造假内幕[N];中国经营报;2001年
8 记者 张平阳 杨斌鹄;快速检测甲流 西安批量生产关键设备[N];西安日报;2009年
9 王迪方文;等待突破[N];医药经济报;2007年
10 季爱华;饲料中牛羊源性成分测定新法通过审定[N];中国食品报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2 渠柏艳;基于血液样品和微流控芯片技术的细胞分离、PCR扩增及DNA测序方法研究[D];东北大学;2009年
3 陈寒玉;多氯联苯类环境激素的实时定量免疫PCR检测方法研究[D];东华大学;2009年
4 张丽;实时定量PCR检测儿童急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因[D];北京协和医学院;2011年
5 李泽松;缺失型α-地中海贫血基因诊断芯片及在分子流行病学研究中的应用[D];重庆大学;2008年
6 陈智勇;胰腺癌相关基因mucin4的初步研究[D];第二军医大学;2005年
7 王彦君;细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因微卫星多态性与炎症性肠病相关性研究[D];吉林大学;2008年
8 马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
9 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
10 张云霞;基于纳升级液滴阵列的实时定量RT-PCR系统的研究及其在单细胞中MicroRNA定量检测中的应用[D];浙江大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王稳;利用RT-PCR验证基于小鼠外显子芯片发现的脑缺血相关基因表达的研究[D];西北农林科技大学;2010年
2 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
3 郭世奎;实时荧光定量PCR技术对结直肠癌患者肠道微生态的研究[D];昆明医学院;2011年
4 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
5 刘志国;实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
6 郑升博;猪链球菌多重PCR检测方法的建立及屠宰场样品感染率的调查研究[D];上海交通大学;2010年
7 刘宁;PCR扩增16srRNA基因以快速诊断败血症及分型细菌[D];南昌大学;2010年
8 陈晶晶;不同纳米材料对PCR优化作用的研究及机制探讨[D];东华大学;2011年
9 谭景尹;PCR—膜芯片~(?)技术检测结核杆菌耐药基因突变的应用研究[D];广西医科大学;2011年
10 王文娟;食源性致病菌多重PCR检测试剂盒的研制与应用[D];山东农业大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026