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《上海应用技术大学》 2016年
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三萜类物质的提取及抗肿瘤活性研究

孙培龙  
【摘要】:三萜是一类天然活性物质,灵芝是三萜含量较高的真菌,传统的有机溶剂浸提等提取方法效率较低且有溶剂残留,随着超声、微波和超高压技术应用于三萜的提取,效率有所提高,但超高压对设备条件要求高。三萜类物质具有显著地抑制肿瘤活性,一直是研究的热点。目前我国富含三萜类成分的饮料尚未深度开发,三萜类饮料具有广阔的前景。基于此,本课题首先以灵芝(GanodermaLcidum)三萜为研究对象,结合压力和温度两个重要的提取因素,使用高压提取法提取三萜,以降低对设备的要求和提高操作的安全性,并与超声和微波提取法进行对比,以期开发一种高效便捷的三萜提取方法;其次以齐墩果酸和熊果酸等典型三萜为研究材料,处理MGC803、Caco-2以研究其抗肿瘤活性,处理Ana-1细胞以研究其氧化损伤修复作用;最后以提取的三萜为原料,通过对饮料的风味和稳定性进行优化研究,制备富含三萜的饮料。实验结果表明:在三种经单因素优化的提取方法中,高压提取法效率最高,仅30min提取率达到13.31mg/g,超声和微波提取法提取率最高分别为10.08mg/g和12.21mg/g,高压提取法分别提高了 30%和10%。进一步通过响应面优化高压提取法的最佳提取条件为:温度87℃、75%乙醇、压力1MPa、料液比50ml/g、时间30min,提取率达到了 14.21%;其次,MTT实验结果显示齐墩果酸和熊果酸均能显著抑制MGC803和Caco-2细胞的增殖,抑制率具有时间和浓度依赖性,齐墩果酸和熊果酸抑制MGC803和Caco-2细胞的IC50浓度分别为45μg/ml和30μg/ml、85μg/ml和60μg/ml。Western blot实验结果显示熊果酸能显著性下调p53蛋白的表达,表明p53蛋白参与了熊果酸抑制MGC803细胞增殖过程。氧化损伤修复实验结果显示齐墩果酸和熊果酸能显著提高过氧化氢损伤的Ana-1细胞存活率,以上结果表明以齐墩果酸和熊果酸为代表的三萜类物质具有显著性抑制肿瘤和氧化损伤修复活性;最后,饮料的工艺研究表明,糖酸比主要影响饮料的口感,果汁对饮料风味影响较大,胶体能增加饮料的稳定性。经优化后,三萜饮料的主要组分为25ml、0.1M柠檬酸、25ml、0.1M苹果酸、150ml、1M白砂糖溶液;60ml苹果汁,30ml柠檬汁;0.3g三萜;食用胶添加量为1%(胶体复配黄原胶与魔芋胶比例为2:1)。本研究可为三萜的高效提取和深度开发研究提供参考,具有一定的理论和实际价值。
【学位授予单位】:上海应用技术大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:TS275.4

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【参考文献】
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