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枇杷叶中科罗索酸的分离纯化及降血糖活性研究

宋星  
【摘要】:近年来糖尿病患病率持断上升,从天然产物中提取高效又无毒副作用的降血糖功能成分,成为糖尿病研究的热门话题。枇杷叶是我国常用传统中药,科罗索酸属于枇杷叶中主要的功能成分——三萜酸类物化合物。本论文以枇杷叶为原料,建立高效液相色谱法测定科罗索酸含量的方法,优化科罗索酸的提取、分离纯化工艺,并研究其降血糖作用。主要研究结果如下:1.建立了高效液相色谱法快速测定枇杷叶中科罗索酸含量的新方法。样品通过HPLC在Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)上分离,以甲醇-1%醋酸水(体积比为92:8)作为流动相,流速为1.0 m L/min,柱温30℃,在波长210 nm处检测。结果表明:科罗索酸标准品的线性回归方程为:y=3.78×106x-6227.14,R2=0.9991,在0.0125-0.4 mg/m L的科罗索酸浓度范围内,响应峰面积与浓度有良好的线性关系,平均加标回收率为99.67%。2.研究比较了不同提取方法提取科罗索酸的最佳工艺:采用超声辅助提取法,按料液比1:20(g/mL)加入90%乙醇溶液,在50℃下超声提取30 min得率最高,为0.68%;采用微波辅助提取法,按料液比1:10(g/mL)加入90%乙醇溶液,在微波功率200 W条件下提取4 min得率最高,为0.52%。最优提取条件下,超声提取得率比微波提取得率高30.77%,而微波提取能节约提取时间87%,节约50%提取溶剂。3.联合采取大孔吸附树脂富集纯化、硅胶柱层析和重结晶的方法对粗提物进一步分离纯化。大孔树脂分离纯化工艺条件为:最佳大孔吸附树脂为HZ802,粗提物上样质量浓度8 mg/mL,上样流速2 BV/h,上样体积3 BV;洗脱剂为90%乙醇,洗脱流速2 BV/h,洗脱剂用量2.5 BV,由此得到的科罗索酸纯度为34.12%;硅胶柱层析工艺条件为:干法上样量为:样品:硅胶(1:50),洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯(2:1,v/v),最终得到的科罗索酸纯度为53.28%;分离样品用90%乙醇重结晶精制,得到科罗索酸纯度为96.43%。4.研究含科罗索酸提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠(DM)的降血糖功能。以腹腔一次性注射160 mg/kg STZ建立DM模型。实验分为7组:正常对照组,DM对照组,含科罗索酸提取物低、中、高剂量组(50,150,300 mg/kg BW),格列齐特阳性对照组(50 mg/kg BW)和科罗索酸标准品对照组(5 mg/kg BW)。考察枇杷叶中含科罗索酸提取物对小鼠生理生化指标及脏器指数的影响。结果表明各给药组空腹血糖浓度(FBG)极显著下降(P0.01);中、高剂量组和格列齐特组胰岛素水平(INS)显著增加(P0.05);各组HDL-C显著增加,中剂量组和格列齐特组血清TC、TG显著下降(P0.05),而对LDL-C和脏器指数无明显影响。表明含科罗索酸提取物具有降血糖和调节血脂代谢作用。此研究结果为科罗索酸的药物开发和临床应用提供了依据和参考。


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