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《上海海洋大学》 2018年
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市售虾中副溶血性弧菌耐药性的监测与暴露评估

牛丽  
【摘要】:虾是南亚和东南亚等最为重要的海产品,以其营养丰富、味道鲜美受到人们的喜爱。虾因为含有丰富营养物质成为食源性病原体的载体。副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是引起肠胃不适、腹泻等疾病的主要病源性细菌。由于抗生素药物不合理、过度使用,使细菌对药物产生抗药,甚至为多重耐药菌株(Multidrug antimicrobial resistant bacteria,MDRO),因此,监测虾中耐药菌的多样性是控制抗生素使用和保障食品安全的关键。目前研究关于虾中耐药菌多样性检测的应用尚是空白。本课题旨在研究:1)虾中耐药菌多样性的检测,以达到对虾中耐药菌的多样性进行精确监控。2)目前仍缺少对VP耐药性的快速检测方法和暴露评估研究。3)同时针对多重耐药菌株生长异质性进行比较研究,为耐药菌风险评估提供基础数据。1)虾中耐药菌检测多样性检测为研究虾中磺胺嘧啶、盐酸四环素、链霉素耐药菌种类及污染情况,选取上海市3大(曹杨、东方国际、恒大)水产品市场作为研究对象,通过使用PCR-DGGE检测样品中耐药菌的多样性并通过PCR检测耐药基因(Antibiotic resistance genes,ARGs)的多样性。结果显示:弧菌属是磺胺嘧啶、四环素、链霉素耐药菌中的优势菌属(占磺胺总耐药菌44.9%;四环素类总耐药菌的38.2%;占链霉素类总耐药菌41.1%),耐药菌的种群随着抗生素浓度的增加而减少。淡水虾中弧菌属和气单胞菌属为优势菌属,分别占总耐药29.16%和25.32%;弧菌属占海水虾总耐药菌的57.07%。sul I、sulII和strB耐药基因在所有耐药菌中菌检出,大部分耐药菌中检出tetA、tetB、str A耐药基因,耐药基因sulII、tetW、tetM和tet K未检出。通过香农-威纳多样性指数(H')发现,各大水产品市场的虾样品之间的微生物群落存在明显差异(p0.05),虾从养殖场运到水产品市场的过程中没有交叉污染,说明可能是水产品市场中的二次污染导致微生物的多样性。这是首次检测水产中耐药菌多样性,通过研究PCR-DGGE检对虾中耐药菌多样性,以达到对虾中耐药菌的多样性进行精确监控。2)不同来源VP耐药情况比较研究为了比较不同来源以及不同致病性VP耐药性差异,通过改良K-B纸片法对44株VP进行抗生素耐药性检测,应用PCR技术对其耐药基因(Antibiotic resistance genes,ARGs)进行检测。结果表明:从海水虾和淡水虾分离的副溶血性弧菌菌株的耐药表型无明显差异,其耐药率分别为100%和95.5%;但是致病性菌株多重耐药性(Multidrug antimicrobial resistant,MDR)高达73.7%,显著高于非致病性VP(其为16%);不同来源以及不同致病性菌株所含耐药基因种类和数量并无显著差异。本研究为VP耐药多样性普查提供基础数据,并对进一步研究抗药菌风险评估提供相关帮助。3)耐药性VP生长异质性比较研究在不同温度(10、20、30、37℃)下,比较17株不同耐药性、耐药表型及基因型不一致的副溶血性弧菌在碱性蛋白胨水(3%NaCl)中最大比生长速率及生长快慢之间的差异。应用Bioscreen C全自动微生物生长曲线分析仪测定副溶血性弧菌的最大比生长速率,构建不同温度下生长曲线,采用修正后的Gompertz模型进行拟合得出生长动力学参数。不同耐药性副溶血性弧菌μ_(max)存在一定差异,差异随着温度的降低而增加,抗生素耐药种类越多,其μ_(max)越大;同一温度下,耐药表型与基因型不一致的副溶血性弧菌其生长参数存在一定的差异,但是菌株的生长参数的差异与菌株耐药表型与基因型不一致之间没有明显的对应关系。菌株之间的微生物生长动力学参数的异质性将会对风险评估的准确性带来影响,此结果可为多重耐药副溶血性弧菌风险评估提供基础数据支持。
【学位授予单位】:上海海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:TS254.7

【参考文献】
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【共引文献】
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