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《上海海洋大学》 2018年
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猴头菌单核体杂交及原生质体融合品质育种的研究

杨珊  
【摘要】:猴头菌(Hericium erinaceus)是我国珍贵的食药用兼用真菌,有“山珍猴头,海味燕窝”的美称。猴头菌化学成分非常复杂,有多糖、甾醇类、萜类、脂肪酸、酚类等化合物,猴头菌子实体也具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、抗衰老等多种功效。随着对猴头菌的深入研究,猴头菌类产品也日益增多,猴头菇市场需求量急剧增大,而优良猴头菌株是获得高品质猴头菇的前提和基础。因此,选育活性代谢物含量高、生物学转化率高的菌株具有实际应用价值。本文以生物转化率较高的猴头菌株0605和子实体形态较好的刺长菌株为亲本菌株,制备原生质体单核体,进行单核体杂交和原生质体融合育种,对得到的杂合子和融合子进行鉴定、筛选和栽培,以活性成分、营养成分及外观品质等为主要指标筛选优良猴头菌品种。本论文主要研究内容如下:1.通过单因素试验和正交试验确定了猴头菌原生质体制备与再生的最佳条件:酶系统2.0%溶壁酶+0.5%崩溃酶,酶解温度32℃,酶解时间2.5 h,菌丝体菌龄10 d,恒温摇床转速120 rpm,在此制备条件下,猴头菌原生质体的数量和再生率均较高,分别为13.10×10~6个/mL、0.83%,可以得到较高质量的猴头菌原生质体。2.本研究通过原生质体单核化获得了猴头菌0605单核体18株、猴头菌刺长单核体12株,并以此材料进行216次杂交,通过镜检两亲本单核体交错生长的菌丝是否有锁状联合得到30株猴头菌杂交菌株。对30株猴头菌杂合菌株和亲本进行生物学特征分析比较得到:杂交菌株ZJ513的菌丝生长速度相对亲本菌株0605提高了45.46%,杂交菌株ZJ917生物量相对亲本菌株0605提高了43.08%。对30株菌株栽培后的农艺性状分析发现:杂交菌株ZJ1210单产最高,相对于亲本菌株刺长提高了7.14%;ZJ105、ZJ909、ZJ1018三株杂交菌株的子实体菇形相对于两亲本较好。3.对30株猴头菌杂交菌株栽培子实体的营养及活性成分分析研究表明,子实体多糖含量最高的是ZJ917,相对亲本0605提高63.70%;子实体中蛋白质含量最高的是ZJ507,相对亲本0605提高5.7%;ZJ917子实体中麦角甾醇含量最高,相对亲本0605提高了9.0%。呈味物质分析结果表明,ZJ1113子实体鲜味氨基酸含量最高,ZJ1204甜味氨基酸最高,鲜味核苷酸以杂交菌株ZJ908最高;ZJ906的EUC值最高,达Mau分级第三水平。4.对原生质体融合的双亲灭活条件进行优化,结果表明猴头菌0605采用热灭活,55℃处理120 min,猴头菌刺长采用紫外灭活,距离15 W的紫外灯20 cm垂直照射26 s,致死率均达100%。通过单因素试验对融合条件进行优化得到猴头菌0605和猴头菌刺长的最佳融合条件为:30%的PEG 6000,Ca~(2+)浓度10 mmol/L,融合时间25 min,融合温度32℃,融合pH 9.5,在此条件下融合率最高为2.499×10~(-5)%。5.对融合后挑选出来的67株生长速度较快的再生菌株经SSCP和RAPD分析鉴定筛选得到14株融合菌株,对其生物学性状进行分析发现:融合菌株R51’和R53’的菌丝生长速度最快为0.422 cm/d,相对于亲本菌株0605提高了24.48%;R52’生物量最高,达到13.925 g/L,超出了亲本刺长生物量的28.05%;融合菌株R17’的菌丝体多糖含量高于亲本0605,相对于亲本0605提高了7.43%。6.14株猴头菌融合菌株进行了子实体栽培,融合菌株R28子实体单产略高于亲本菌株刺长为146.39g。子实体多糖含量分析结果表明,14株融合子菌株中有2株融合菌株R29和R52’子实体多糖含量高于亲本0605,分别提高了22.27%和22.78%。子实体中游离氨基酸含量结果显示,14株融合菌株中融合菌株R29的谷氨酸含量、鲜味氨基酸含量、甜味氨基酸含量均最高分别为9.26mg/g、12.09mg/g和5.90mg/g,超出亲本菌株0605子实体5.47%、6.70%和9.46%。
【学位授予单位】:上海海洋大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S646

【参考文献】
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