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《华东师范大学》 2012年
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从分子水平研究和比较两种腹毛目纤毛虫休眠包囊和营养细胞

郑丽娜  
【摘要】:原生动物纤毛虫是一种单细胞真核生物,在环境不利于其生命活动时,往往会分泌特殊物质形成包囊并且转入休眠状态。之后,如果环境条件转为有利于其生命活动时,形成包囊的纤毛虫又会脱囊而出,进行正常的生命活动。有研究表明,纤毛虫在形成包囊和脱包囊过程中,细胞会经历不同于营养细胞的分化和调控过程,这使得休眠包囊成为一种不同于营养细胞的研究样本。纤毛虫包囊现象的研究已成为探讨纤毛虫系统学和细胞结构与功能、细胞模式形成及其控制机理的一个重要内容。目前国内外对纤毛虫休眠现象的研究主要集中在包囊结构的形成以及形成包囊过程中细胞质及细胞核的显微和亚显微水平变化;包囊形成过程中细胞皮层纤毛小器官的脱分化和再分化的形态学变化等方面。在分子方面对纤毛虫休眠现象进行探讨的很少。从生化与分子水平上展开研究,能更深刻地阐明纤毛虫包囊现象的本质和调控机理。 本文在以往工作的基础上,以腹毛目纤毛虫冠突伪尾柱虫和大尾柱虫作为实验材料,利用实时荧光定量PCR,双向电泳技术,质谱分析及生物信息学等技术,从生物化学和分子生物学水平上多种角度对纤毛虫休眠包囊和营养细胞进行比较研究,重点对这两种纤毛虫休眠包囊和营养细胞的差异基因和差异蛋白进行定性和定量分析。目的是通过休眠包囊和营养细胞在分子水平的比较,寻找出可能与调控纤毛虫进入休眠状态有关的基因,及了解这个过程中的蛋白变化。所得研究结果有助于我们进一步了解纤毛虫休眠包囊的生命活动物质基础及其可能的功能,有利于我们深刻理解真核细胞在休眠状态下的结构与功能及代谢与调控等。所得的实验结果与结论如下:1.冠突伪尾柱虫休眠包囊和营养细胞基因表达水平的相对定量分析 利用实时荧光定量PCR技术对冠突伪尾柱虫休眠包囊和营养细胞的基因表达水平进行了比较研究。后续还对扩增出的DNA片段进行了测序,并在NCBI中进行了BLASTx和BLASTn搜索,通过与已知功能蛋白或核酸序列进行相似性比较,探讨这些基因在冠突伪尾柱虫由营养细胞转变为休眠包囊的过程中可能发挥的作用。结果表明,利用设计合成的15条引物,冠突伪尾柱虫的休眠包囊和营养细胞都扩增出了相应的DNA片段,但是在量上有所不同,而且通过多次的重复实验验证了这种差异具有一定稳定性。其中,1个候选基因在休眠包囊中表达下调,而14个候选基因在休眠包囊中表达上调。实验结果表明,冠突伪尾柱虫休眠包囊和营养细胞中这些基因在表达量上存在着一定的差异,因此推测基因表达的变化是冠突伪尾柱虫从代谢旺盛的营养状态进入相对静止状态的休眠期所需的。 2.大尾柱虫休眠包囊和营养细胞基因拷贝数的相对定量分析 应用实时荧光定量PCR技术对大尾柱虫休眠包囊和营养细胞的基因拷贝数进行了比较分析。后续还对扩增出的DNA片段进行了测序,并在NCBI中进行了BLASTx和BLASTn搜索,通过与已知功能蛋白或核酸序列进行相似性比较,探讨这些基因在大尾柱虫由营养细胞转变为休眠包囊的过程中可能发挥的作用。结果表明,利用设计合成的7条特定引物,在大尾柱虫的休眠包囊和营养细胞中都扩增出了相应的DNA片段,但是7个候选基因的拷贝数在休眠包囊中都下降了,而且通过多次的实验验证了这种差异具有一定稳定性。实验结果表明,大尾柱虫休眠包囊和营养细胞的这些基因在基因拷贝数上存在着一定的差异,而基因拷贝数的差异也可能会在一定程度上影响该基因的表达量,从而影响该生物的性状。因此推测基因拷贝数的变化可能会影响到相应基因的表达,从而调控大尾柱虫由营养细胞转变为休眠包囊。 3.大尾柱虫休眠包囊和营养细胞全蛋白的双向电泳分析及质谱分析 应用蛋白质组学的三大关键技术,即双向电泳技术、质谱技术和生物信息学,比较分析了大尾柱虫休眠包囊和营养细胞全蛋白的成分。对这两种不同生理状态下的大尾柱虫进行双向电泳图谱比较分析后,共筛选出32个蛋白量差异在3倍以上的蛋白点,其中20个是上调蛋白点,即休眠包囊中表达量明显增加的蛋白质,12个是下调蛋白点,即休眠包囊中表达量明显减少的蛋白质。再从上调蛋白点中选择了6个蛋白点进行质谱分析,其中4个蛋白点得到与其较匹配的已知功能的蛋白,分别是氨基酸ABC转运蛋白、耐热丝氨酸蛋白酶和Ⅱ型角蛋白,并具体分析了这些蛋白在纤毛虫包囊形成过程中可能发挥的作用。
【学位授予单位】:华东师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:Q953

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李祥春;张开光;;组织蛋白酶B与胃癌研究进展[J];安徽医药;2010年09期
2 顾福康,张作人;纤毛虫形成包囊和脱包囊的研究及其意义[J];动物学杂志;1992年05期
3 胡惠忠;付强;卢晟盛;张明;陆阳清;蒙冰;卢克焕;;猪卵母细胞蛋白质组双向电泳体系的建立及初步分析[J];动物学杂志;2008年04期
4 陈旭;齐凤坤;康立功;李景富;;实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J];东北农业大学学报;2010年08期
5 顾福康,倪兵,季玲妹,隋淑光;魏氏拟尾柱虫休眠包囊及其细胞器超微结构的观察[J];动物学研究;1999年06期
6 陈灵,倪兵,顾福康;魏氏拟尾柱虫休眠包囊细胞器的电镜酶细胞化学研究[J];动物学研究;2000年03期
7 张国安,许雪姣,张素艳,樊惠芝,杨芃原;蛋白质组的分离与分析及其应用进展[J];分析化学;2003年05期
8 赵焕英;包金风;;实时荧光定量PCR技术的原理及其应用研究进展[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年04期
9 张蓓;实时荧光定量PCR的研究进展及其应用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2003年06期
10 顾福康,杜宝剑,倪兵,季玲妹;贻贝棘尾虫休眠包囊胞质的电镜酶细胞化学[J];华东师范大学学报(自然科学版);2002年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张廷婷;李春娟;闫彩霞;孙兵;郑奕雄;单世华;;荧光定量PCR技术检测花生种皮抗黄曲霉基因表达强度[J];山东农业科学;2012年05期
2 张红梅;朱洪亮;费贤明;周红;;柱前衍生反相液相色谱法测定饲料中氨基酸含量[J];安徽农学通报;2007年07期
3 张鲁;;食品中沙门氏菌检测方法的探讨[J];安徽农业科学;2008年02期
4 李启琳;李燕鹏;王士长;;分子生物学技术在瘤胃纤毛虫研究中的应用[J];安徽农业科学;2008年03期
5 黄德娟;黄德超;徐卫东;罗明标;金卫根;刘亚洁;饶军;;抚河源头水生生态环境评价[J];安徽农业科学;2010年04期
6 金卫根;唐婷婷;黄德娟;周亚平;;抚河河口浮游动物多样性研究[J];安徽农业科学;2010年26期
7 阎中军;张佑祥;;吉首大学风雨湖淡水原生动物群落结构研究[J];安徽农业科学;2010年28期
8 沈言虎;张鹏;丁铁林;杨泉泉;颜秉秉;孙东旭;;高效提取肠道菌群总DNA方法的建立[J];安徽农业科学;2011年18期
9 郭凌;李建新;黄丽;罗曾玲;涂艳丽;陈玲珍;万辉;万柏青;陈文;;转基因食品检测技术研究进展[J];安徽农业科学;2011年28期
10 邢娟娟;张建军;杨兴中;吕彬彬;王晓臣;;泾洋河夏季浮游生物群落结构特征[J];安徽农业科学;2012年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曾思遥;张淑琼;余绍华;唐志玲;陈瑞爱;罗满林;;TaqMan实时荧光定量PCR检测PCV2方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 李昂;刘丽平;肖文权;王光瑛;连森阳;彭亮;翁辉;吴旭;;番鸭GH基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
3 汪世华;胡开辉;;蛋白质组学的应用与发展趋势[A];福建省科协第五届学术年会提高海峡西岸经济区农业综合生产能力分会场论文集[C];2005年
4 李春海;;生物质谱技术在肿瘤标志筛查及研究中应用[A];第三届“分子核医学在肿瘤诊断与治疗中的应用与研究进展”全国肿瘤分子标志的研究与方法学进展学术交流会资料汇编[C];2006年
5 张丽萍;倪兵;季玲妹;张许枚;顾福康;;阔口尖毛虫纤毛器皮层和细胞核的超微结构观察[A];动物学专辑——上海市动物学会1997年年会论文集[C];1997年
6 赵柳;尹飞;倪兵;顾福康;;华美游仆虫大、小核的透射电镜和生化抽提-扫描电镜观察[A];2008年上海市动物学会学术会议论文集(一)[C];2008年
7 李恭楚;顾福康;季玲妹;倪兵;;齿脊肾形虫休眠包囊的细胞器及其酶细胞化学的研究[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
8 王宏伟;郭立格;张蕾颖;杨丽坤;沈卓;赵建华;张振强;;白洋淀原生动物初步调查[A];中国动物学会北方七省市动物学会学术研讨会论文集[C];2005年
9 李春海;;蛋白质组学在肿瘤标志筛查及研究中应用[A];第一届中国肿瘤微创治疗研讨会暨中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会论文集[C];2005年
10 李春海;;蛋白质组学在肿瘤标志筛查及研究中应用[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 伊珍珍;旋唇纲、寡膜纲和前口纲纤毛虫原生动物研究[D];中国海洋大学;2009年
2 苗晶晶;苯并[a]芘对栉孔扇贝分子毒理学机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 任红敏;大黄酚对黄瓜白粉病菌的抑制作用机制研究[D];河北农业大学;2011年
4 赵斌;生物数学的起源与形成[D];西北大学;2011年
5 姚维志;青海湖夏季饵料生物资源研究[D];西南大学;2011年
6 孙晓芳;三七总皂苷防治博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的实验研究[D];北京中医药大学;2011年
7 姚君;携带hIL-10基因的双歧杆菌治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究[D];暨南大学;2011年
8 生欣;腹毛类纤毛虫阔口游仆虫微管类细胞骨架及γ-微管蛋白的研究[D];华东师范大学;2011年
9 王铭玮;上海城市水源地蓝藻暴发的影响因素及控制管理体系研究[D];华东师范大学;2011年
10 吴君;基于β_3-AR探讨缩泉丸补肾缩尿的作用机制[D];广州中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨堃;鹅CYP7A1基因克隆、表达调节及表达规律的研究[D];华中农业大学;2010年
2 徐杰;生物信息学在家蚕中用应用及Ras相关CTP结合蛋白C(BmRGPC的表达研究)[D];浙江理工大学;2010年
3 葛红秀;家蚕钙磷蛋白(BmCAPS)的原核表达及定位分析[D];浙江理工大学;2010年
4 苏晓东;氯化汞对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素表达的影响[D];郑州大学;2010年
5 徐红明;小麦抗白粉病相关基因的克隆与分析[D];郑州大学;2010年
6 李安;猪瘟病毒强毒株与疫苗C株鉴别方法的建立及疫苗病毒定量检测的研究[D];山东农业大学;2010年
7 刘建;三个意蜂种群MRJP3的基因表达及其蛋白含量的比较分析[D];安徽农业大学;2010年
8 孙美莲;茶儿茶素生物合成相关基因表达的实时荧光定量PCR分析[D];安徽农业大学;2010年
9 杨志艺;镉处理对花生品质、生理机制和金属硫蛋白Ⅱ型基因表达的影响[D];中国海洋大学;2010年
10 姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 顾福康,张作人;包囊游仆虫包囊形成和解脱过程中纤毛器的分化[J];动物学报;1991年03期
2 顾福康,张作人;包囊游仆虫包囊形成和解脱过程中大、小核的研究[J];动物学报;1992年02期
3 金立培,金华中;冠突伪尾柱虫小核对胞口结构稳定性的影响[J];动物学报;2002年02期
4 顾福康,季玲妹,倪兵,李恭楚;阔口尖毛虫形成包囊期间细胞超微结构的观察[J];动物学报;1997年03期
5 顾福康,张作人;纤毛虫形成包囊和脱包囊的研究及其意义[J];动物学杂志;1992年05期
6 刘星吟,毛永真,陈建欢,李甘霖,金立培;大型纤毛虫总RNA的提取方法[J];动物学杂志;2004年05期
7 吴月华,季玲妹,顾福康;原生动物细胞休眠现象的研究进展[J];动物学杂志;2004年05期
8 陈季武,倪兵,顾福康;两种纤毛虫营养细胞和休眠细胞蛋白组成的比较分析[J];动物学杂志;2005年05期
9 何大澄,肖雪媛;差异蛋白质组学及其应用[J];北京师范大学学报(自然科学版);2002年04期
10 王超;孟祥晨;;荧光分子信标探针检测双歧杆菌的研究[J];东北农业大学学报;2008年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈季武;倪兵;顾福康;;不同生理状态下膜状急纤虫大核DNA和线粒体DNA的多态性比较[J];动物学杂志;2006年01期
2 赵晗;章骏;盛春;;不同生理状态下原生动物草丛土毛虫大核DNA的多态性比较[J];上海师范大学学报(自然科学版);2010年01期
3 顾福康,倪兵,杨振云,杜宝剑;冠突伪尾柱虫营养期和形成包囊期间细胞的超微结构[J];动物学报;2002年02期
4 杨振云,顾福康,倪兵,季玲妹;营养期和休眠期冠突伪尾柱虫的类中间纤维-核纤层-核骨架体系[J];动物学研究;2001年01期
5 顾福康,杜宝剑,倪兵,季玲妹;贻贝棘尾虫休眠包囊胞质的电镜酶细胞化学[J];华东师范大学学报(自然科学版);2002年02期
6 倪兵,隋淑光,顾福康;包囊游仆虫营养细胞和休眠细胞的胞器酶细胞化学[J];华东师范大学学报(自然科学版);2004年04期
7 顾福康,倪兵,季玲妹,隋淑光;魏氏拟尾柱虫休眠包囊及其细胞器超微结构的观察[J];动物学研究;1999年06期
8 陈灵,倪兵,顾福康;魏氏拟尾柱虫休眠包囊细胞器的电镜酶细胞化学研究[J];动物学研究;2000年03期
9 田沁,张莉,隋淑光,倪兵,顾福康;休眠期和营养期包囊游仆虫的纤毛器骨架及其微管蛋白[J];动物学研究;2002年05期
10 顾福康,倪兵;包囊游仆虫休眠包囊的超微结构研究[J];实验生物学报;1995年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈季武;李俊纲;顾福康;;膜状急纤虫休眠包囊与营养细胞的比较研究[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
2 李恭楚;顾福康;季玲妹;倪兵;;齿脊肾形虫休眠包囊的细胞器及其酶细胞化学的研究[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
3 倪兵;朱慧;李艺松;隋淑光;顾福康;;两种纤毛虫营养细胞和休眠细胞中类中间纤维骨架体系的比较[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
4 王素娟;徐蕾;周一红;;条斑紫菜单孢子形成过程的电镜与分子生物学研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
5 隋淑光;倪兵;顾福康;;包囊游仆虫营养细胞和休眠细胞的类中间纤维—核纤层—核骨架体系及其蛋白组成[A];中国原生动物学学会第十一次学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
6 张莉;倪兵;隋淑光;顾福康;;两种纤毛虫营养细胞和休眠细胞的胞器酶细胞化学[A];中国动物学会原生动物学分会第十二次学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
7 孙福生;朱彤;;杨树花粉内生殖细胞的发育和雄性生殖单位的形成[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
8 朱明;阎斌伦;;具槽直链藻生长条件和生活史的研究[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
9 刘小意;金立培;;冠突伪尾柱虫小核基因组转录活性的差示分析[A];中国原生动物学学会第十一次学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
10 陈季武;顾福康;朱振勤;;两种纤毛虫脱包囊前后包囊壁蛋白质的比较研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 香红星;走进微生物世界让这个“小精灵”为你增效[N];中国畜牧兽医报;2006年
2 ;家用商品主打新、奇、特[N];深圳商报;2004年
3 赵玉山;庭院栽药花 观赏又增收[N];中国特产报;2002年
4 李泓新;不能一拒了之[N];中国质量报;2008年
5 尹巍;空腹饮酒吃苦头[N];中国石油报;2003年
6 沈晓夫;微循环疾病悄然逼近年轻人[N];中国中医药报;2003年
7 吴新华;草原奇珍地皮菜[N];中国特产报;2000年
8 浙江温州市中医院肾内科 董飞侠;胆固醇低了同样危害大[N];大众卫生报;2005年
9 黄剑;刺五加能除氧自由基[N];上海中医药报;2004年
10 谭西顺;皮肤皱纹的控制与消除[N];中国医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 陈季武;不同生理条件下两种纤毛虫细胞的比较研究[D];华东师范大学;2003年
2 盛春;不同生理状态下草丛土毛虫的细胞结构及大核DNA多态性研究[D];华东师范大学;2010年
3 汪文俊;红毛菜发育过程及其生理基础[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
4 李艺松;利用SSrRNA序列对四种腹毛目纤毛虫系统进化及一种纤毛虫细胞结构的研究[D];华东师范大学;2004年
5 高辉;蚬木Excentrodendron hsienmu H.T. Chang & R.H. Miau的生物学研究及其保护生态学意义[D];四川大学;2006年
6 石磊;hstK基因家族的pkn44和pkn30在鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞特异性糖脂合成中的作用[D];华中农业大学;2008年
7 王朝晖;中国典型近海海域甲藻孢囊分布及其与富营养化和赤潮生消关系研究[D];暨南大学;2007年
8 崔彬彬;白杨派树种及其三倍体杂种细胞质遗传研究[D];北京林业大学;2009年
9 杨小龙;长角血蜱卵黄发生及其激素调控[D];河北师范大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑丽娜;从分子水平研究和比较两种腹毛目纤毛虫休眠包囊和营养细胞[D];华东师范大学;2012年
2 赵晗;不同生理状态下草丛土毛虫的超微结构观察及大核DNA多态性研究[D];上海师范大学;2010年
3 史磊;土壤纤毛虫草丛土毛虫皮层微管胞器的研究[D];华东师范大学;2009年
4 李俊纲;大尾柱虫营养细胞与休眠细胞超微结构和类中间纤维的比较研究[D];华东师范大学;2004年
5 顾立刚;包囊游仆虫不同时期超微结构变化及γ—微管蛋白分布变化[D];华东师范大学;2005年
6 黄颉刚;云南微小按蚊卵巢营养细胞多线染色体观察[D];广西医科大学;2001年
7 王丽;条斑紫菜性别差异基因的筛选和初步分析[D];苏州大学;2008年
8 熊德甫;不同环境因子对有害赤潮生物[D];暨南大学;2009年
9 吴月华;一种改进的FLUTAX方法的建立及游仆虫细胞微管骨架的研究[D];华东师范大学;2005年
10 项文钰;实验室条件下紫菜生活史多样性的观察[D];苏州大学;2006年
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