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《华东师范大学》 2017年
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俄罗斯鲟Acipenser gueldenstaedtii幼鱼对饲料铜的需要和利用研究

王和伟  
【摘要】:铜是包括鱼在内所有动物的必需营养元素,铜以辅酶的形式在体内发挥生理作用,机体氧化还原反应、铁离子代谢、能量生成、胶原合成和脑神经递质生成等一系列生理生化过程都和铜有关。饲料铜是鱼类铜的主要来源,过量的铜会对鱼类造成氧化损伤和毒性作用。鱼体内铜含量的高低受到吸收和排出两个关键环节的影响,其中铜在鱼消化道内的吸收、利用过程过程尤为重要。影响鱼类饲料铜吸收的因素很多,铜的化学形式是其中最主要的一个因素。俄罗斯鲟Acipenser gueldenstaedtii是世界范围内广泛养殖的一种经济鱼类。迄今为止,俄罗斯鲟铜营养生理研究还比较滞后。为探究铜对俄罗斯鲟的基本生理作用,查明俄罗斯鲟饲料铜的需要量以及俄罗斯鲟对饲料铜的生物利用率,本文主要进行以下四方面的研究:1)饲料铜对俄罗斯鲟幼鱼生长、体组生化和抗氧化能力的影响;2)俄罗斯鲟对饲料铜水平响应的转录组学分析;3)俄罗斯鲟幼鱼对不同铜源的生物利用率比较研究;4)俄罗斯鲟铜转运蛋白克隆、组织分布及表达分析。取得的主要结果和结论如下:1.饲料铜对俄罗斯鲟幼鱼生长、体组生化和抗氧化能力的影响为探讨铜对俄罗斯鲟生长、体组生化和抗氧化能力的影响并估测俄罗斯鲟饲料铜的需要量,以硫酸铜(CuSO4·5H2O)为铜源向半纯合料中添加0、1、2、4、6、8和16mg/kg的饲料铜(实测值分别为0.3、1.5、2.4、4.4、6.2、8.3和16.1mg/kg)配制7种试验饲料。每种试验饲料分别投喂3缸俄罗斯鲟幼鱼(重量11.84 ± 0.07 g)8周,养殖期间水体铜含量0.8-1.2 μg/L。结果显示:饲料铜含量2.4-8.3 mg/kg组俄罗斯鲟增重率和饲料转化率显著高于0.3、1.5和16.1 mg/kg组,其中6.2 mg/kg组俄罗斯鲟增重率最高。饲料铜含量6.2-16.1 mg/kg组俄罗斯鲟全鱼和肝脏铜含量显著高于其他各组。饲料铜含量6.2和8.3 mg/kg组俄罗斯鲟肝脏铜锌超氧化物歧化酶活力、肝脏总抗氧化能力和血清铜蓝蛋白活力显著高于其他各组,肝脏丙二醛含量显著低于其他各组。各组鱼存活率、肝脏指数、内脏指数、肥满度、全鱼粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分无显著差异。以增重率、全鱼铜含量、肝脏铜锌超氧化物歧化酶和血清铜蓝蛋白活力为评价指标计算得到俄罗斯鲟幼鱼饲料铜需要量为7-8 mg/kg。结果表明水体中铜不能满足俄罗斯鲟的生长,生产中必须在饲料中额外补充铜,但过量添加铜也会导致俄罗斯鲟生长性能和抗氧化能力下降,建议生产中俄罗斯鲟幼鱼饲料铜控制在7-8 mg/kg。2.俄罗斯鲟对饲料铜水平响应的转录组学分析为更好地揭示铜的生理作用,需要进一步了解铜对俄罗斯鲟基因表达的影响,为此选择了饲料铜含量为0、6和16 mg/kg(简记为铜缺乏组、铜适宜组和铜过量组)组俄罗斯鲟肝脏进行转录组测序分析。Illumina测序结果显示,除去低质量片段后共拼接出72270条基因(unigene),平均长度1053 bp,N50长度1328 bp。与铜适宜组鲟相比,铜缺乏组共有1750个基因表达发生显著性上调,463个基因发生显著性下调。铜过量组发生显著性上调和下调的基因数目分别为3228和1938。GO分析表明,铜缺乏组有187个生物过程(BP),34个细胞组分(CC)和118个分子功能(MF)发生显著变化,对应的注释数目在铜过量组分别为225、29和140。KEGG分析表明铜缺乏组有30条通路发生显著性变化,铜过量组有38条通路发生显著性变化。上述发生显著性变化的功能和通路主要与能量物质(糖类和脂类)代谢、免疫功能和信号转导通路有关。试验结果提示铜主要通过能量和免疫相关途径来影响俄罗斯鲟的生长和生理功能,今后鱼类铜营养生理研究可聚焦在能量代谢和免疫相关通路。3.俄罗斯鲟幼鱼对不同铜源的生物利用率比较研究为研究俄罗斯鲟对饲料中硫酸铜(CuS04)、蛋氨酸铜(CuMet)和纳米氧化铜(CuONano)三种形式铜的利用率。向半纯合基础饲料(对照组)中添加2、4、6、8 和 16 mg/kg 铜的 CuMet 或 CuONano,4、6 和 16 mg/kg 铜的 CuSO4。每种饲料投喂3缸俄罗斯鲟(重量9.82 ± 0.08 g)8周,养殖试验结束后进行嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila攻毒和铜表观消化率测定。结果表明:与CuSO4相比,达到相同增重率、组织铜含量、抗氧化和免疫能力需要的CuMet和CuONano形式铜更少。CuMet和CuONano组鱼铜表观消化率高于CuSO4组,抗A.hydrophila感染能力也更强。CuSO4、CuMet和CuONano三种铜源最大增重率(WGR)、全鱼铜含量、铜表观消化率、铜锌超氧化物歧化酶活力(Cu-Zn SOD)、总抗氧化能力、溶菌酶、免疫球蛋白M含量分别在6、4和4mg/kg饲料铜组获得,最大值之间无显著差异。以WGR、Cu-Zn SOD活力、全鱼铜含量为评价指标,CuMet和CuONano的生物学效价约为CuSO4的1.5-2.0倍,根据铜源种类的差异俄罗斯鲟幼鱼饲料铜的适宜需要量为5-8 mg/kg。综上,CuMet和CuONano比CuSO4生物学效价更高,可以有效地被机体利用而减少俄罗斯鲟饲料中铜的添加量。这对控制养殖生产中饲料铜的排出、减少水环境污染有重要的借鉴作用。但CuMet和CuONano和CuSO4相比没有额外促生长效应,吸收效率的提高是导致生物效价升高的主要原因。4.俄罗斯鲟铜转运蛋白克隆、组织分布及表达分析为了解俄罗斯鲟对饲料中不同铜源吸收差异的原因,分别选择铜源生物利用率试验中铜水平为4、6和16 mg/kg组鲟样品从分子水平进行以下三方面研究:1)俄罗斯鲟铜转运蛋白Ctr1 cDNA全长克隆;2)俄罗斯鲟Ctr1、ATP7A和ATP7B在组织中mRNA表达;3)不同饲料铜源对俄罗斯鲟Ctr1、ATP7A、ATP7B、CCS和SOD基因表达的影响。试验结果:1)Ctr1在鳃、心脏、肝脏和前肠高表达,ATP7A在前肠、肝脏、脾脏和鳃,ATP7B在肝脏和鳃中表达量较高;2)克隆得到编码202个氨基酸的俄罗斯鲟铜转运蛋白Ctr1。该蛋白有三个跨膜区,N端和C端存在富含蛋氨酸的铜结合位点。3)鲟饲料中分别添加4和6 mg/kg饲料铜时,CuMet 和 CuNano 组鲟 Ctr1、ATP7A 和 ATP7B mRNA 表达量高于 CuSO4组,对应的Ctr1蛋白表达量在CuMet和CuNano组也较高。当饲料铜含量为16 mg/kg时,Ctr1蛋白表达量降低。Cu-Zn SOD和CCS荧光定量结果显示可能不存在转录水平的Cu-Zn SOD表达调控。以上结果显示,俄罗斯鲟饲料铜的主要吸收部位在前肠,肝脏是其铜代谢的中心器官。饲料中氨基酸螯合形式铜或纳米形式铜比硫酸铜更能够在RNA和蛋白水平上调铜转运相关蛋白的表达,从而有效提高了铜的消化吸收和保留率。
【学位授予单位】:华东师范大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S965.215

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 范泽军;邹鹏飞;姚翠鸾;;鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展[J];水生生物学报;2015年01期
2 高露姣;夏永涛;黄艳青;师伟;庄平;张涛;宋超;;俄罗斯鲟鱼卵与西伯利亚鲟鱼卵的营养成分比较[J];海洋渔业;2012年01期
3 张美莉;翟少伟;;有机微量元素在家禽生产中的应用[J];现代农业科技;2007年13期
4 李家奎,郑鑫,杨连玉,王哲;不同形态的铜对猪生长性能及血清GH、血浆NPY水平的影响[J];中国兽医学报;2004年05期
5 计峰,罗绪刚,李素芬,刘彬,余顺祥;动物有机微量元素吸收机制及吸收研究方法的进展[J];动物营养学报;2003年02期
6 张彤晴,张亢西;关于俄罗斯鲟的形态特征及其生物学特性[J];江苏农业科学;2002年02期
7 陈昌福,纪国良;草鱼的血清、体表和肠粘液中溶菌物质活性及其特性[J];华中农业大学学报;1992年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 朱浩拥;俄罗斯鲟幼鱼(Acipenser gueldenstaedtii)肝脂沉积的营养调控研究[D];华东师范大学;2016年
2 高晨;纳米氧化铜在Caco-2细胞模型及鸡肠道中吸收转运机制的研究[D];吉林大学;2014年
3 孙晓译;纳米给药系统的胞内转运研究[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 卢彩霞;铜、铁、锰、锌四种微量元素对花(鱼骨)生长和主要生理机能的影响[D];苏州大学;2009年
【共引文献】
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1 贺敏;周晓春;陈鹏;张昕;王玉明;薛长湖;王静凤;;鲫鱼卵唾液酸糖肽对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化及OPG/RANKL基因表达的影响[J];中国食品学报;2015年11期
2 张洁;郑津辉;李庆亚;耿绪云;孙金生;潘宝平;孙世南;高虹;;牙鲆(Paralichthys olivaceus)TLR21基因在迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染后的表达特征[J];海洋与湖沼;2015年06期
3 李显;沈建明;何莫斌;庞继达;俸祥仁;兰宗宝;;猪粪有机化处理副产酵母铜、锌对仔猪生长的影响[J];中国畜禽种业;2015年10期
4 兰方菲;吴华东;何余湧;张泳桢;吴红翔;舒邓群;;生态环保型日粮对生长猪生产性能及减排效果的影响[J];猪业科学;2015年04期
5 武国华;高晓阳;张东阳;李龙;;家蚕5龄幼虫农药中毒后中肠和丝腺组织中的部分金属元素含量变化[J];蚕业科学;2015年03期
6 龚洋洋;黄艳青;陆建学;黄洪亮;高露姣;夏永涛;张涛;庄平;;不同配比南极磷虾粉饲料对网箱养殖俄罗斯鲟生长及氟累积的影响[J];海洋渔业;2015年02期
7 李梦云;刘振华;杨建平;朱宽佑;张晓根;;有机微量元素对初产母猪生产性能及血液指标的影响[J];家畜生态学报;2015年03期
8 龚洋洋;黄艳青;陆建学;夏永涛;高露姣;张涛;黄洪亮;庄平;;饲料中添加南极磷虾产品对施氏鲟鱼子酱品质的影响[J];海洋渔业;2015年01期
9 蒋左玉;李建;姚俊杰;熊铧龙;柏后伟;何丁;;山泉水人工养殖金鳟鱼卵及鱼皮营养成分的测定与分析[J];食品科学;2015年01期
10 金成龙;翟振亚;王丹;高春起;严会超;叶剑;王修启;;甘氨酸铜替代硫酸铜对断奶仔猪生长性能、血清生化参数和粪铜排放的影响[J];广东农业科学;2015年01期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马倩倩;中华绒螯蟹饲料适宜脂肪源筛选并提高其利用效率的研究[D];华东师范大学;2018年
2 王和伟;俄罗斯鲟Acipenser gueldenstaedtii幼鱼对饲料铜的需要和利用研究[D];华东师范大学;2017年
3 刘志;生长期蓝狐饲粮适宜铜水平和铜源的研究[D];中国农业科学院;2016年
4 张伶燕;有机铁源的化学特性、对肉仔鸡的相对生物学利用率及其小肠铁吸收研究[D];中国农业科学院;2016年
5 吉利伟;鸡内服酒石酸泰乐菌素首过效应及其机制的研究[D];南京农业大学;2015年
6 周华锋;TPGS及其衍生物修饰辅酶Q10纳米乳的心肌靶向研究[D];东南大学;2015年
7 高晨;纳米氧化铜在Caco-2细胞模型及鸡肠道中吸收转运机制的研究[D];吉林大学;2014年
8 管庆霞;中药多成分嵌段共聚物纳米递药系统的研究(Ⅱ)[D];黑龙江中医药大学;2014年
9 杨飞飞;基于细胞穿膜肽修饰的新型非病毒载体的构建、筛选及递送功能siRNA治疗恶性肿瘤的研究[D];北京协和医学院;2013年
10 郭新红;2-甲氧基雌二醇脂质纳米粒水凝胶的研究[D];沈阳药科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 丁明岩;VA、VD对两种规格斜带石斑鱼生长、饲料利用、脂肪代谢及FAS、HL mRNA表达量的影响研究[D];广东海洋大学;2015年
2 胡田恩;牛蛙钙磷营养生理的研究[D];集美大学;2015年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙大江;马国军;吴文化;;我国鲟鱼子酱产业现状和发展趋势[J];中国水产;2011年07期
2 吉红;孙海涛;单世涛;;池塘与网箱养殖匙吻鲟肌肉营养成分及品质评价[J];水产学报;2011年02期
3 姜周熙;;顶级珍馐鱼子酱[J];海洋世界;2010年12期
4 王念民;杨贵强;彭涛;孙大江;王常安;;三种鲟鱼及其杂交种肌肉营养成分分析[J];吉林农业大学学报;2010年S1期
5 沈硕;周继成;赵思明;熊善柏;;匙吻鲟的营养成分及肌肉营养评价[J];营养学报;2009年03期
6 董宏伟;韩志忠;康志平;曲立;郭维士;杨成辉;邹作宇;;匙吻鲟含肉率及肌肉营养成分分析[J];淡水渔业;2007年04期
7 高露姣;施兆鸿;马春艳;林黑着;;亲鱼的脂类营养与繁殖性能研究进展[J];海洋渔业;2006年02期
8 户业丽;程波;余东良;袁强;汪畅;张翌;蓝泽桥;;施氏鲟鱼肉营养成分的分析[J];食品研究与开发;2006年04期
9 邴旭文,蔡宝玉,王利平;中华倒刺鲃肌肉营养成分与品质的评价[J];中国水产科学;2005年02期
10 成廷水,呙于明,袁建敏;日粮中添加氨基酸络合锌、铜、锰对蛋鸡产蛋性能、免疫及组织抗氧化机能的影响[J];中国家禽;2004年19期
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 李俐华;CTR1、ATP7A、ATP7B在大鼠顺铂耳毒性中的作用与硫酸铜的干预研究[D];中南大学;2012年
2 孙晓译;纳米给药系统的胞内转运研究[D];浙江大学;2010年
3 文华;施氏鲟幼鱼对饲料中部分营养素的需求与利用研究[D];华中农业大学;2008年
4 王华丽;纳米硒的生物利用和毒性研究[D];中国科学技术大学;2007年
5 曾端;具有脂肪肝症状的几种海水养殖鱼脂类代谢和运输的研究[D];中国海洋大学;2007年
6 侯俊利;施氏鲟(Acipenser schrenckii)幼鱼对盐度的适应性及其脂肪营养需求研究[D];华东师范大学;2006年
7 刘志伟;铜的肠道上皮细胞毒性和对大鼠的亚急性毒性研究[D];复旦大学;2004年
8 柴春彦;铜缺乏症奶牛神经损伤分子机理[D];东北农业大学;2000年
9 黄国健;金属硫蛋白与铜抗肿瘤作用相互关系的实验研究[D];中国协和医科大学;1997年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王蕾;付世建;曾令清;;流量和时间对中华倒刺鲃幼鱼标准代谢率测定的影响[J];西南大学学报(自然科学版);2017年09期
2 杨贵强;张永旺;徐绍刚;贺杰;王建;;不同摄食水平哲罗幼鱼排氨率的研究[J];中国农学通报;2014年35期
3 魏广莲;徐钢春;顾若波;徐跑;;两种配合饲料对刀鲚幼鱼消化系统显微结构和功能的影响[J];大连海洋大学学报;2014年01期
4 尤宏争;孙志景;崔宽宽;郑艳坤;张勤;包海岩;;布氏鲷幼鱼耗氧率和窒息点研究[J];水产科技情报;2014年03期
5 宋学宏,陈祖培,王志林,杨彩根,陈超,许爱国,卢磊;黄颡鱼当年幼鱼的生长特性[J];水利渔业;2003年04期
6 任东;新型幼鱼饲料[J];饲料博览;1994年04期
7 汝少国,侯文礼,张梅英,岳玉环;电厂冷却水对梭幼鱼热效应的研究[J];环境科学;1995年05期
8 关地;新型幼鱼饲料[J];内陆水产;1995年01期
9 周秀琴;;新型幼鱼饲料[J];今日科技;1990年05期
10 郑文彪;;温度对胡子鲶(Clarias fuscus)胚胎和幼鱼发育的影响[J];生态学杂志;1987年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王妤;宋志明;刘鉴毅;庄平;章龙珍;;点篮子鱼幼鱼的热耐受特征[A];2016年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2016年
2 张涛;李伟杰;庄平;章龙珍;侯俊利;杨刚;宋志明;;俄罗斯鲟幼鱼的胃排空特征及其数学模型[A];2014年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2014年
3 王妤;宋志明;刘鉴毅;赵峰;庄平;章龙珍;;温度对点篮子鱼幼鱼代谢酶活性的影响[A];2015年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2015年
4 李丹;林小涛;李想;朱志明;;流速对罗非鱼幼鱼游泳行为的影响[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年
5 刘超;胡文佳;陈明茹;杨圣云;;山口红树林生态系统稚幼鱼多样性及对渔业资源的补充作用[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2012年学术研讨会论文摘要汇编[C];2012年
6 何伟;陈波见;曹振东;付世建;;温度和急性低氧对鳊鱼幼鱼糖代谢酶活性的影响[A];中国海洋湖沼学会鱼类学分会、中国动物学会鱼类学分会2012年学术研讨会论文摘要汇编[C];2012年
7 张倩;康斌;;水流对团头鲂(Megalobrama amblycephala)幼鱼游泳行为的影响[A];山地环境与生态文明建设——中国地理学会2013年学术年会·西南片区会议论文集[C];2013年
8 吴萍;何珠子;魏育红;陈立侨;;三倍体泥鳅幼鱼的营养分析[A];2006年上海市动物学会学术年会论文集[C];2006年
9 孙云章;杨红玲;凌泽春;叶继丹;常建波;;斜带石斑鱼稚鱼和早期幼鱼消化道菌群研究[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
10 曾令清;李凤杰;曹振东;张耀光;;南方鲇幼鱼的胃排空特征及其数学模型比较[A];中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集(下册)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 丁蔚文;收紧执法“网眼”,放幼鱼一条生路[N];新华日报;2018年
2 岳德亮;浙江实施新规保护海洋幼鱼资源[N];中国海洋报;2017年
3 一鸣;立法禁售幼鱼抓住了关节点[N];宁波日报;2017年
4 记者 杨世朋 通讯员 金妍妍;我市打响“最严”幼鱼保护攻坚战[N];温州日报;2016年
5 浙宣;拯救幼鱼 浙江严下“军令”[N];中国海洋报;2016年
6 记者 刘慧静 通讯员 张鸿宾;打响最严幼鱼保护攻坚战[N];舟山日报;2016年
7 本报记者 朱小兵 本报通讯员 孙标;我市“幼鱼保护攻坚战”首战告捷[N];台州日报;2016年
8 记者 祝梅 通讯员 蒋嬿钦;我省打响保护幼鱼攻坚战伏休保卫战[N];浙江日报;2016年
9 钟欣 编译;二氧化碳尝试升高导致幼鱼被攻击的可能性增加[N];中国气象报;2010年
10 本报记者 邹倜然 本报通讯员 史春波;东海幼鱼滥捕为何屡禁不止?[N];工人日报;2016年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王和伟;俄罗斯鲟Acipenser gueldenstaedtii幼鱼对饲料铜的需要和利用研究[D];华东师范大学;2017年
2 李琦;俄罗斯鲟幼鱼(Acipenser gueldenstaedti)的脂肪酸需要量和适宜脂肪源研究[D];华东师范大学;2017年
3 彭士明;黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)脂类与维生素E的营养生理研究[D];华东师范大学;2008年
4 张国斌;胭脂鱼幼鱼适宜蛋白水平及中草药对其非特异性免疫机能的影响[D];华中农业大学;2009年
5 朱浩拥;俄罗斯鲟幼鱼(Acipenser gueldenstaedtii)肝脂沉积的营养调控研究[D];华东师范大学;2016年
6 刘佳琳;镉和砷对褐牙鲆幼鱼毒理效应的组学研究[D];中国科学院烟台海岸带研究所;2017年
7 董婧;肉碱对鲤鱼幼鱼脂肪酸代谢调控作用的研究[D];吉林农业大学;2014年
8 张凯凯;大菱鲆幼鱼几种功能性氨基酸营养代谢的研究[D];中国海洋大学;2014年
9 文华;施氏鲟幼鱼对饲料中部分营养素的需求与利用研究[D];华中农业大学;2008年
10 关健;大菱鲆耐高温品系选育及生长相关数量性状的基础研究[D];中国海洋大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曹平;基于鱼类游泳行为特性的鱼道水力学研究[D];中国水利水电科学研究院;2018年
2 毛盼;青鱼幼鱼低鱼粉饲料中添加牛磺酸的应用研究[D];湖南农业大学;2014年
3 李启亮;云斑尖塘鳢幼鱼饵料筛选和补偿生长的研究[D];中国海洋大学;2014年
4 李可贵;摄食、力竭性运动及其交互作用对鲇鱼幼鱼代谢及酸碱状态的影响[D];重庆师范大学;2010年
5 齐国山;饥饿对星突江鲽幼鱼影响的初步研究[D];中国海洋大学;2009年
6 逯尚尉;不同饵料、密度和光周期对点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)幼鱼的影响[D];南京农业大学;2010年
7 戴立贤;云斑尖塘鳢幼鱼摄食、生长与耗氧率研究[D];华中农业大学;2004年
8 韦庆杰;尼罗罗非鱼幼鱼对缬氨酸需求量的研究[D];南京农业大学;2015年
9 程燕;医用臭氧对斑马鱼幼鱼缺氧脑损伤的影响[D];南方医科大学;2015年
10 崔昊;硒对鲤幼鱼的免疫和组织影响及饲料中硒的吸收动力学特征[D];大连海洋大学;2017年
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