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《华东师范大学》 2006年
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线粒体和DNA完整性在中华绒螯蟹精子质量评价中的应用

范丽君  
【摘要】:一、中华绒螯蟹精子线粒体的研究 以中华绒螯蟹肌肉、鳃和精巢为对照,从线粒体标志酶SDH活性、线粒体特异性荧光探针(Rh123)以及线粒体16S rDNA三个方面入手,探讨了该蟹精子线粒体的存在情况。研究发现,肌肉和鳃SDH酶活性较高,精巢SDH酶活性显著低于肌肉和鳃,而精子SDH酶活性则因过低而无法检测到。Rh123的检测发现,精巢中有较强的荧光,而精子中则无法观察到。通过Genebank中已有中华绒螯蟹线粒体16S rDNA序列设计引物,利用PCR扩增方法,以beta-actin做对照,检测了中华绒螯蟹肌肉、鳃、精巢和精子中线粒体16S rDNA扩增情况,发现各组织或细胞beta-actin扩增片段大小、条带宽度和亮度基本一致,表明各模板DNA量基本一致;而在同一DNA浓度下,16S rDNA的扩增片段长度虽一致,但其产物量存在明显差异,精子16S rDNA产物量显著低于其他3种组织,其条带宽度和亮度很弱;16S rDNA扩增产物经测序分析与已有序列完全吻合。上述结果表明,河蟹精子中存在线粒体,但其线粒体的数量极显著低于精巢和其他组织,这也是SDH酶活性和Rh123等方法以及常规的组织学和超微结构研究难以检测到其精子线粒体的原因。 二、单细胞凝胶电泳检测HgCl_2及CdCl_2对河蟹精子DNA损伤的研究 研究氯化汞和氯化镉对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)(河蟹)精子DNA的损伤,分别以0、0.01、0.05、0.1、1、5mmol/L剂量的氯化汞和氯化镉处理河蟹成熟精子,应用单细胞凝胶电泳技术检测氯化汞、氯化镉对河蟹精子DNA迁移距离(彗星尾长)和DNA损伤率的影响,结果显示:对照组的DNA未损伤,在电场中核DNA几乎不泳动,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾现象;染毒组精子DNA受损,染色后呈一个亮的头部和尾部,DNA受损越严重,尾部就越长,甚至核骨架也丧失。随着氯化汞和氯化镉剂量的升高,河蟹精子DNA损伤率和DNA迁移距离也随之增加,DNA损伤率和迁移距离与氯化汞、镉的浓度存在明显的剂量—效应关系。因而,单细胞凝胶电泳技术可以用于河蟹精子DNA损伤的检验,为进一步评价河蟹精子质量提供了方法。
【学位授予单位】:华东师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q954.43;Q78

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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3 贾秀芬;郭铁云;周燕华;纪红;秦逸人;刘慧雯;;抗氧化剂对小鼠体外受精胚胎发育的影响[J];解剖科学进展;2009年01期
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4 王树国 黄威巍;河北本地蟹难求 胜芳蟹有待发展[N];中国食品报;2009年
5 记者 王森;盘锦河蟹“横行天下”[N];盘锦日报;2007年
6 郑桂娥 吴战庆 首席记者 包枝彬;胡家镇全力助推河蟹产业发展[N];盘锦日报;2010年
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