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《上海师范大学》 2011年
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罗汉果总苷的微生物转化研究

司鹏鹏  
【摘要】:罗汉果总苷是一类主要由葫芦素烷三萜类皂苷组成的有效部位,迄今为止,在罗汉果的不同部位已经分离纯化得到了12种葫芦烷三萜类化合物。因罗汉果总苷含糖配基的数量较多,极性大,人体不易吸收,故生物利用度很低。利用微生物产生的酶水解糖苷键脱掉部分糖配基可使其极性降低,从而提高糖苷类物质的吸收率。本文对罗汉果总苷的微生物转化进行了研究。 采用一株产高活性β-葡萄糖苷酶的青霉属真菌J-9对罗汉果总苷进行生物转化。利用TLC法分别对罗汉果总苷及其转化产物进行鉴别,优化其展开剂条件,确定展开剂的最佳配比为氯仿:甲醇:水=10:4:0.3。通过硅胶柱层析和C18反相柱层析分离纯化得到了高纯度转化产物A、B和C。 经过熔点、比旋光度、质谱、紫外光谱、红外光谱和核磁共振的解析鉴定转化产物的化学结构:A为罗汉果醇-24-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷;B为罗汉果醇-3-O-β-葡萄吡喃糖基-24-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷;C为11-酮-罗汉果醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-24-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷,A、B、C三种化合物均未见文献报道。 通过色谱条件的优化建立了同时测定转化产物A、B的HPLC方法,色谱条件为:色谱柱为ZWA C18(250×4.60mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~15min,25%A→40%A;15~23min,40%A),流速(0~15min,1.0ml/min→0.5 ml/min;15~23min,0.5ml/min),柱温为30℃,进样量为5μl,检测波长为203nm。化合物A和B的线性回归方程分别为:Y=459.9X+0.2252,r=1.0000;Y=642.5X+25.17,r=1.0000,线性范围分别为0.992~9.92μg和0.229~2.29μg。化合物A和B的加样回收率分别为(99.3±1.12%)、(97.8±1.68)%。 为了提高青霉属真菌J-9对罗汉果总苷的转化率,对其培养基组成和摇瓶发酵工艺条件进行了优化,确定了发酵培养基的组成为:土豆20%(煎汁),玉米粉1.5%,麸皮1.5%,KH2PO4 0.2%。摇瓶发酵工艺条件为:培养基的初始pH值为6,底物浓度为5mg/mL,28℃、220r/min,摇瓶培养4天时产物B的转化率最高,摇瓶培养7天时产物A的转化率最高。 由罗汉果总苷中原有皂苷的化学结构、转化产物A、B、C的化学结构和转化产物生成时间等可以推断,罗汉果苷V首先被青霉属真菌J-9产生的(1→6)-β-D-葡糖糖苷酶水解,脱去3位和24位末端的2个(1→6)-β-葡糖糖苷键连接的葡萄糖生成化合物B,再进一步被β-葡糖糖苷酶水解脱去3位上的1个β-葡萄糖苷键连接的葡萄糖生成化合物A。11-酮-罗汉果苷Ⅴ被青霉属真菌J-9产生的(1→6)-β-D-葡糖糖苷酶水解,脱去3位和24位末端的2个(1→6)-β-D-葡萄糖苷键连接的葡萄糖生成化合物C或者转化产物B在氧化酶的作用下转化成化合物C。
【学位授予单位】:上海师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S567.239

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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