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《上海师范大学》 2011年
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云芝糖肽(PSP)对LPS刺激的小鼠巨噬细胞ROS及MAPK信号通路的研究

董莎莎  
【摘要】:云芝糖肽(PSP)是从云芝COV-1菌株深层发酵菌丝体中提取的肽结合多糖。临床上用于提高机体免疫功能、拮抗化疗药物引起的毒副反应,并有抗肿瘤活性及增强亚健康人群机体的免疫力的作用,动物实验发现PSP还有抗炎的作用,但为何PSP具有免疫促进和抗炎的双向调节作用,其机制尚不十分清楚。 本研究以小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞系为研究模型,通过用流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)表达、ELISA检测IL-6,以及Western blot分析MAPK信号通路中信号分子的表达,探讨了PSP的双向免疫调节作用机制。 流式细胞分析发现,中、高剂量组(25、100?g/mL) PSP单独作用巨噬细胞可促进ROS的产生,荧光强度分别比对照组高出8.58%、9.69% (p0.05)。当巨噬细胞用LPS刺激时,5、25、100?g/mL PSP则可降低ROS的产生,使荧光强度比LPS组降低7.16%、6.97%、9.04%,100?g/mL PSP的结果达到统计学显著(p0.05)。 ELISA分析结果显示,25、100?g/mL PSP单独作用于巨噬细胞时可呈剂量依赖性地上调IL-6的产生,IL-6浓度分别为20.89±1.46pg/mL、31.16±3.78pg/mL比正常细胞对照组(13.26±0.20pg/mL)高出57.54%和135.05%(p0.05)。而对于用LPS刺激的巨噬细胞,相同浓度的PSP反而能减少IL-6的产生,使浓度分别比LPS组(1825.34±18.32pg/mL)下降了44.46%和31.88%(p0.01)。 Western blot结果发现,5、25、100?g/mL PSP单独作用于巨噬细胞可促进p38、JNK和ERK的磷酸化,使p-p38水平分别比对照组高出63.74%、90.11%、168.13%;p-JNK分别比对照组高出4.27%、23.45%、35.17%;p-ERK分别比对照组高出49.51%、44.66%、54.37%。这种上调作用在高浓度组达到统计显著性。而对于用LPS刺激的巨噬细胞,相同浓度的PSP反而能减少p-p38、p-JNK、p-ERK的产生,使p-p38水平分别比LPS组下降26.17%、31.71%、59.76%(p0.05);使p-JNK相对光密度分别比LPS组下降19.17%、39.39%、43.75%(p0.05);使p-ERK相对光密度分别比LPS组下降4.9%、50.64%(p0.05)、57.72%(p0.05),在各处理组中相应非磷酸化分子的表达水平不受PSP的影响。 综上所述,PSP能够激活正常静息状态的巨噬细胞,上调巨噬细胞内ROS、IL-6及MAPK信号通路中p-p38、p-JNK、p-ERK的产生。对于用LPS刺激的巨噬细胞,相同浓度的PSP反而能减少上述炎症介质及蛋白的产生。因此PSP可通过影响ROS,IL-6,参与MAPK通路调控,达到双向免疫调节的作用。
【学位授予单位】:上海师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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