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《上海体育学院》 2010年
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MGF对骨骼肌卫星细胞激活的影响及与其增殖的量效关系

吴嵽  
【摘要】:研究目的 在骨骼肌生长、发育、损伤和修复过程中,骨骼肌卫星细胞起着重要的作用。有在体研究表明,机械生长因子(MGF)可能能激活骨骼肌卫星细胞,并促进其增殖。本研究在此基础上通过离体实验,观察MGF对于骨骼肌卫星细胞的激活作用及促进其增殖的量效关系,探讨MGF对骨骼肌卫星细胞在细胞水平的调节机制,为骨骼肌损伤的修复提供了理论依据。 实验方法 原代骨骼肌卫星细胞取自4周龄雄性SD大鼠(2只,120g)双侧的腓肠肌与比目鱼肌。经0.1%Ⅱ型胶原酶结合0.25%胰蛋白酶消化法,通过两次差速贴壁纯化骨骼肌卫星细胞,使用横纹肌肌动蛋白鉴定骨骼肌卫星细胞的纯度。原代骨骼肌卫星细胞经两次传代后,使用不同浓度的MGF干预第三代细胞,浓度分别为10ng/ml,25ng/ml,50ng/ml, 100ng/ml,200ng/ml,在干预24h、48h、72h、96h后利用MTT法进行增殖效果的检测。使用25ng/ml的MGF对血清饥饿24h后的第三代骨骼肌卫星细胞进行干预,对比DMEM干预的骨骼肌卫星细胞,分别在8h、16h、24h、32h后使用流式细胞仪检测其所处细胞周期,测定其激活情况。 实验结果 1.骨骼肌卫星细胞活力达到98.8%。 2.骨骼肌卫星细胞纯度为97.4%。 3.MTT比色法的A值显示:48h:25ng/ml组、50ng/ml组A值显著高于对照组(P0.01), 10ng/ml组A值高于对照组(P0.05), 100ng/ml组、200ng/ml组与对照组之间差异没有显著性(P0.05), 100ng/ml与200ng/ml组的促增殖作用差异没有显著性(P0.05);96h:10ng/ml与对照组之间差异没有显著性(P0.05),25ng/ml组、50ng/ml组、100ng/ml组、200ng/ml组A值显著高于对照组和10ng/ml组(P0.01),25ng/ml组、50ng/ml组、100ng/ml组、200ng/ml组之间差异没有显著性(P0.05)。低剂量的MGF即可促进骨骼肌卫星细胞的增殖,随浓度升高至25ng/ml至50ng/ml时,MGF促骨骼肌卫星细胞增殖作用相对更明显,浓度继续升高,会出现增殖速度减缓现象;各个时相检测后发现MGF干预到96h增殖速度减缓。结合时间-剂量的结果显示,在48h时25ng/ml组和50ng/ml组有交互作用。 4.使用不含血清的DMEM饥饿骨骼肌卫星细胞24h后,处于GO期的细胞达到了86.76% 5.25ng/ml MGF干预GO期的卫星细胞后,8h时MGF组和对照组之间差异没有显著性(P0.05),16h时MGF组G0/G 1期细胞含量低于对照组(P0.05),24h时MGF组低于对照组(P0.01),32h时MGF组低于对照组(P0.05)。 结论 1.MGF可以促进骨骼肌卫星细胞增殖。 2.MGF促进骨骼肌卫星细胞增殖呈现剂量和时间依赖性,较理想剂量范围在25ng/ml至50ng/ml之间,干预24h后即开始增殖。 3.不含血清的DMEM饥饿骨骼肌卫星细胞24h可以使其退出细胞周期。 4.MGF可以激活四周龄SD大鼠的GO期骨骼肌卫星细胞。
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