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《南京大学》 2012年
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促进大鼠子宫壁全层损伤后功能性修复的实验研究

李新安  
【摘要】:研究背景:子宫内膜过度损伤或重度炎症可造成宫腔粘连,引起闭经、继发不孕或胎盘植入异常等,临床上针对重度宫腔粘连的治疗方法有限。组织工程的兴起,为子宫损伤后功能性修复提供了可能的新治疗手段。本研究运用组织工程的方法对不同愈合时期(新鲜创面或陈旧性瘢痕)的大鼠子宫进行修复重建,观察、比较胶原生物支架及生长因子对子宫内膜、平滑肌和血管的修复及瘢痕形成的影响,以及对子宫恢复妊娠能力的影响。 第一章胶原支架复合碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠子宫壁全层损伤后新鲜创面的修复作用 目的:利用SD大鼠子宫全层1.5cm×0.5cm机械性损伤模型(相当于损伤子宫长度与周径各1/2),研究空白胶原支架、复合NAT-bFGF的胶原支架和复合CBD-bFGF的胶原支架对其新鲜创面的修复作用。 方法:SD大鼠81只,分为五组:假手术组(仅开腹子宫无损伤),自然修复组(子宫损伤后不进行修复干预),胶原支架/PBS组(子宫损伤后缝合空白胶原支架),胶原支架/NAT-bFGF组(子宫损伤后缝合复合NAT-bFGF的胶原支架),胶原支架/CBD-bFGF组(子宫损伤后缝合复合CBD-bFGF的胶原支架)。术后30天及90天分别再次开腹,观察子宫表面粘连、血管生成和宫腔积液情况,进行宫腔通畅试验。将宫腔通畅的子宫取下用福尔马林固定,取损伤中央区组织行HE染色、Masson染色和免疫组织化学染色。术后90天选择成年雄性SD大鼠与实验雌鼠1:1合笼交配,评价妊娠情况。 结果:(1)宫腔通畅试验显示,术后自然修复组宫腔通畅率(45.00%)低于假手术组(100%)、胶原支架/NAT-bFGF组(85.00%)和胶原支架/CBD-bFGF组(95.00%)。术后30天,与胶原支架/PBS组相比,胶原支架/CBD-bFGF组支架外观更接近于周围组织并且表面见丰富的血管。术后90天,各组子宫外观均接近正常组织。(2)术后30天及90天子宫内膜厚度测量显示,胶原支架/CBD-bFGF组损伤区子宫内膜厚度与假手术组无明显差别,明显好于其他三组。(3) Masson染色显示,与胶原支架/PBS组相比,胶原支架/CBD-bFGF组胶原支架重塑明显,损伤区有丰富的血管和细胞,胶原减少。自然修复组出现大量胶原沉积,瘢痕形成。(4)免疫组化显示,胶原支架/CBD-bFGF组损伤区平滑肌含量、微血管数目和增殖细胞数量明显高于自然修复组、胶原支架/PBS组和胶原支架/NAT-bFGF组。(5)妊娠实验显示,胶原支架/CBD-bFGF组妊娠率(86.67%)与假手术组妊娠率(100%)接近,显著高于自然修复组(33.33%)和胶原支架/PBS组(33.33%),但与胶原支架/NAT-bFGF组(60.00%)无统计学差异。胶原支架/CBD-bFGF组中有2个子宫(2/15)在修补区域有胚胎着床,而自然修复组、胶原支架/PBS组和胶原支架/NAT-bFGF组仅在子宫非手术区域有胚胎着床。结论:胶原支架复合CBD-bFGF能更明显地促进大鼠子宫内膜、血管和平滑肌修复,有利于损伤后子宫妊娠能力的恢复。 第二章血管内皮细胞生长因子对大鼠子宫陈旧性瘢痕重塑作用的研究 目的:利用SD大鼠子宫全层损伤后瘢痕性修复模型,研究CBD-VEGF局部应用对模型陈旧性瘢痕的重塑作用。 方法:选取SD大鼠72只,将其子宫壁全层剪去1.0cm×0.5cm,让其自然愈合。术后30天开腹确定瘢痕已形成。将瘢痕子宫的大鼠分为三组:PBS组(瘢痕组织周围注射PBS50μL)、NAT-VEGF组(瘢痕组织周围注射NAT-VEGF0.25nmol)和CBD-VEGF组(瘢痕组织周围注射CBD-VEGF0.25nmol)。注射后3h及6h分别取注射区域的组织,以6XHis标签抗体作为一抗,用Western blot方法测定外源性VEGF含量。注射后30天及60天再次开腹观察子宫表面粘连、血管生成及宫腔堵塞情况。将瘢痕中央区组织用福尔马林固定,行HE染色和免疫组织化学染色。注射后60天选择成年雄性SD大鼠与雌鼠1:1合笼交配,行妊娠实验进行功能学评估,于妊娠中晚期开腹观察雌鼠子宫的受孕情况。 结果:(1)大鼠子宫全层1.0cm×0.5cm机械性损伤术后30天,子宫壁瘢痕愈合。(2)瘢痕局部注射PBS、NAT-VEGF和CBD-VEGF后3h及6h, Western blot结果显示,PBS组组织无外源性VEGF表达,CBD-VEGF组注射区域外源性VEGF含量明显高于NAT-VEGF组。(3)注射后30天及60天HE染色结果显示,CBD-VEGF组子宫内膜胶原沉积较NAT-VEGF组和PBS组明显减少,内膜厚度和腺体数量明显高于NAT-VEGF组和PBS组。(4)免疫组化染色显示,CBD-VEGF组平滑肌含量和内膜血管数量明显高于NAT-VEGF组和PBS组,且其肌层结构排列较NAT-VEGF组和PBS组清晰。(5)妊娠实验显示, CBD-VEGF组手术区妊娠率(50.00%)显著高于NAT-VEGF组(18.75%)和PBS组(6.25%)。结论:CBD-VEGF在大鼠子宫陈旧性瘢痕局部注射后,能在瘢痕部位保持较高浓度及较长作用时间,发挥促进子宫瘢痕部位快速血管化的作用,有利于陈旧性瘢痕的重塑,从而提高子宫的妊娠能力。
【学位授予单位】:南京大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R713.4

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