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《南京大学》 2017年
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基于γ-H2AX免疫荧光显微镜观察CT检查后外周血淋巴细胞内DNA双链断裂的研究

陶舒敏  
【摘要】:第一部分CT检查对外周血淋巴细胞DNA双链断裂影响的研究目的:评价腹部CT增强检查对外周血淋巴细胞内DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)水平的影响。材料与方法:选取12例健康志愿者,各抽取8 ml静脉血,将每例志愿者的静脉血分为A组、B组、C组和D组,每组2 ml血液,进行体外实验;其中A组外周血作为对照组,不接受CT扫描;B-D组外周血接受相当于1、2、3次腹部CT辐射剂量的扫描。选取30例腹部增强CT检查的患者进行体内实验。在CT检查前(基线组)及检查后5 min(辐射组)分别抽取2ml静脉血,并记录剂量长度乘积(dose-length product,DLP)和 CT 容积剂量指数(volume CT dose index,CTDIvol)。所有血样通过淋巴细胞分离及γ-H2AX蛋白的免疫荧光染色,标记出DSBs。通过重复测量方差分析比较A、B、C、D组间DSBs水平的关系。通过配对样本t检验比较基线组和辐射组间DSBs水平的关系。采用Pearson相关分析分析体内实验组辐射剂量与γ-H2AX焦点增加的关系。结果:在体外试验中,接受CT辐射暴露的B、C、D组血样中DSBs水平均较A组明显升高,升高幅度分别为49.4%、96.6%和149.4%(所有P0.001),且辐射剂量分组与DSBs水平存在线性趋势(P0.001)。在体内实验中,CT检查前γ-H2AX焦点的平均值及标准差为0.62±0.35焦点/细胞,检查后为0.89±0.42焦点/细胞,辐射组血样中淋巴细胞内DSBs水平较基线组DSBs水平升高约43.5%(P0.001);但CT检查后DSBs的增加量与DLP或CTDIvol未发现明显相关性。结论:外周血淋巴细胞内DSBs水平在进行腹部CT增强检查后明显升高,体外研究表明CT检查辐射剂量与细胞内DSBs水平存在线性趋势。第二部分口服维生素C预防CT检查后DNA双链断裂的研究目的:研究口服维生素C对腹部对比增强CT检查后患者外周血中DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)损伤的预防作用。材料与方法:本研究共入组60例腹部对比增强CT检查患者,分为对照组(30例)及预防组(30例)。预防组在CT检查前30~120 min 口服1 g维生素C,对照组不使用任何药物。预防组根据口服维生素C时间点的不同分为3组(30 min,n=16;60min,n=10;120min,n=4)。所有患者在CT检查前及检查后5 min抽取2 ml外周血。将所有血样分离出淋巴细胞,进行免疫荧光染色,标记出细胞核内的代表DSBs的y-H2AX荧光焦点。两组间的计数资料(包括性别和合并症)的组间比较使用卡方检验。两组间计量资料,包括剂量长度乘积(dose-length product,DLP)、CT容积剂量指数(volume CT dose index,CTDIvol)、y-H2AX焦点基线水平间的比较使用t检验及u检验。不同时间点口服维生素C的预防组间γ-H2AX焦点增加的差异性使用ANOVA检验。辐射剂量与γ-H2AX焦点增加的关系使用Pearson相关及Spearman相关分析。结果:对照组和预防组两组间的CTDIvol及DLP没有统计学差异(P值均0.05)。对照组检查后γ-H2AX焦点较检查前平均增加0.49个/细胞,预防组检查后平均增加0.19个/细胞,检查后预防组较对照组y-H2AX焦点增加量显著减少(p0.001),减少量占对照组增加量的61%。在预防组中,γ-H2AX焦点增加量分别与DLP及CTDIvol呈显著相关(r值分别为0.449和0.403,P值均0.05)。不同时间点口服维生素C的预防组间γ-H2AX焦点增加没有表现出差异性(所有P0.05)。结论:检查前口服维生素C能够显著减少腹部对比增强CT检查后的DSBs水平,对CT所致的DNA损伤起到一定保护作用。
【学位授予单位】:南京大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R816

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