中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究

【摘要】：目的通过研究中枢M受体对内毒素血症大鼠脑内星形胶质细胞增殖、活化的影响及对内毒素血症大鼠外周、脑内炎症因子水平的影响,进而探讨脑内M型胆碱能受体与外周、中枢炎症反应的关系和可能机制。 方法实验分为二部分 1.侧脑室注入M受体激动剂/拮抗剂对内毒素血症大鼠脑内星形胶质细胞表达的影响 雄性SD大鼠24只随机分为4组:空白组(N组,n=6),分别于外周静脉和侧脑室注射生理盐水;对照组(C组,n=6),外周静脉注射LPS,侧脑室注入生理盐水;拮抗剂组(A组,n=6):外周注射LPS,侧脑室注入M受体拮抗剂阿托品;激动剂组(M组,n=6),外周注射LPS,侧脑室注入M受体激动剂毒蕈碱。于建模前1h侧脑室干预给药或生理盐水,建模后4h取大鼠大脑,采用免疫组化法测定海马CA1区星形胶质细胞的表达变化。 2.侧脑室注入M受体激动剂/拮抗剂对内毒素血症大鼠脑内及外周炎症因子分泌的影响 分组同第一部分,各组大鼠于建模前1h侧脑室干预给药或生理盐水,建模后4h于腹主动脉取血约5ml,离心后取上清,采用ELISA法检测TNF-α及IL-6的表达。取血同时,断头取两侧海马,组织匀浆后取上清,先行BCA蛋白定量,再用ELISA法检测海马组织TNF-α及IL-6的表达。 结果 1.免疫组化结果 N组大鼠海马星形胶质细胞标志物(GFAP)有少量表达,但染色浅,胞体小,分支少而细长;C组大鼠海马GFAP染色加深,胞体肥大,分支增多变粗;M组能有效抑制LPS诱导的星形胶质细胞的活化;A组则没有这种效应。图像分析显示,与N组相比,其他各组大鼠海马GFAP阳性细胞数及平均光密度值显著增加,差异有统计学意义(P0.05);与C组相比,M组大鼠海马GFAP阳性细胞数及平均光密度值显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。A组与C组相比差异无统计学意义(P0.05)。 2.脑组织及外周血ELISA结果 C组与N组相比,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达明显增加,差异显著(P0.05);M组与C组比较,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达显著减少,两者比较有统计学差异(P0.05);A组与C组相比,脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达无明显变化(P0.05)。 结论 1. LPS可激活星形胶质细胞,使其GFAP表达增加,侧脑室内注射M受体激动剂毒蕈碱能够有效抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化,表现为GFAP阳性细胞数及平均光密度值的显著减少。而侧脑室注射M受体拮抗剂阿托品则没有此效应。 2. LPS可诱导脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达增加,侧脑室注射M受体激动剂毒蕈碱可以有效抑制由LPS介导的脑组织及外周血TNF-α、IL-6表达,而侧脑室注射M受体拮抗剂阿托品则没有此效应。