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《苏州大学》 2012年
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红色荧光人脑胶质瘤干细胞的建立及其生物学特性观察

陈金明  
【摘要】:目的建立体外稳定表达红色荧光蛋白(RFP)的人脑胶质瘤干细胞。方法用带有红色荧光蛋白基因的慢病毒转染人脑胶质瘤干细胞,荧光显微镜下观察RFP阳性细胞表达情况。流式细胞仪分选红色荧光表达的胶质瘤干细胞,完成克隆筛选后的人脑胶质瘤干细胞在体外连续传代培养20代,再次经流式细胞仪测定其转染率;MTT法比较转染前后干细胞的生长曲线变化;通过PCR扩增检测红色荧光(RFP)基因整合到干细胞基因组。然后对转染后的干细胞进行生物学特性分析:细胞免疫组化鉴定转染后干细胞表面标志物CD133、Nestin的表达情况;由于肿瘤干细胞具有多向分化潜能,故在含胎牛血清培养基培养10天诱导其向胶质细胞和神经元细胞分化,细胞免疫组化分析分化后GFAP,S100(胶质细胞样细胞标志物)表达;在血管内皮细胞转化培养基培养10天诱导其向血管内皮细胞分化,并在Matrigel胶中3D培养,在显微镜和荧光显微镜下观察诱导后细胞立体形态,细胞免疫组化分析内皮细胞表面标志物CD31表达;收集红色荧光蛋白表达干细胞移植到绿色荧光裸鼠皮下,成瘤后取出肿瘤,行超薄冰冻切片、HE染色,在荧光显微镜下观察转染后干细胞在绿色荧光裸鼠体内生长方式,红色荧光表达情况,体内细胞形态及肿瘤血管等。结果红色荧光慢病毒转染胶质瘤干细胞体外连续培养20代后,RFP-lentivirus转染率高达75%以上,而且在体内也能稳定表达,生物学特性分析表明转染前后的人脑胶质瘤干细胞没有明显改变。我们采用流式细胞仪筛选,建立了一种在体内外都能够稳定、长期表达RFP的人脑胶质瘤干细胞。结论以RFP为生物标记物的人脑胶质瘤干细胞成功建立,可为将来研究人脑胶质瘤干细胞的深入研究提供理想的材料。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R739.41

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【参考文献】
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