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《苏州大学》 2013年
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蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制

李梦姣  
【摘要】:目的:探讨蓝萼甲素(Glaucocalyxin A,GLA)对人肺癌A549细胞的抑制作用及其作用机制,为GLA的抗肿瘤作用及用于临床提供进一步的实验依据。 方法:以不同浓度的GLA干预体外培养人肺癌A549细胞,用MTT法观察其对A549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化; Hoechst33258染色观察给药后A549细胞核形态的变化,透射电镜(TEM)观察A549细胞超微结构的改变,扫描电镜(SEM)观察A549细胞表面结构改变;western blot法检测GLA对caspase-3、8和PARP蛋白表达的改变。RT-PCR方法检测GLA对A549细胞内caspase-3、8和PARP基因表达的影响。实时定量(Real time)PCR检测A549细胞内microRNA30a的表达情况。 结果:GLA对体外培养A549细胞具有增殖抑制作用(P<0.05,P<0.01),并呈剂量和时间依赖趋势;Hoechst33258染色后,荧光显微镜下可见A549细胞胞核致密浓染;TEM观察可见A549细胞核皱缩、染色质边集等细胞凋亡的特征性改变;SEM观察可见A549细胞微绒毛减少,部分细胞膜表面出现一些大小不一的凹陷或孔洞。流式细胞仪PI单染结果显示不同浓度GLA作用A549细胞48h后,S期细胞比例增加(P<0.05);AnnexinⅤ-FITC双染结果显示不同浓度GLA作用于A549细胞48h后,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.01),3-甲基腺嘌呤(3-MA)与GLA联合应用可使细胞凋亡率增加(P<0.05);GLA干预A549细胞后Western blot检测结果:caspase3、caspase8、PARP蛋白表达上调,且均呈剂量依赖趋势;RT-PCR结果:caspase-3mRNA、caspase-8mRNA、PARPmRNA的表达上调(P<0.05),Real time PCR结果表明,microRNA30a表达下调(P<0.05)。 结论:蓝萼甲素(GLA)对体外培养人肺癌A549细胞的增殖具有一定的抑制作用,并可诱导细胞凋亡和自噬,且可使A549细胞阻滞在S期,其诱导细胞凋亡的机制可能与激活caspase-8信号通路和下调microRNA30a有关。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R734.2

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