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《苏州大学》 2013年
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饱和氢气生理盐水对老龄大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

刘继普  
【摘要】:研究目的:探讨饱和氢气生理盐水(hydrogen-rich saline)对老龄大鼠肾缺血再灌注损伤(renal ischemia/reperfusion injury,RIRI)的影响并初歨研究其相关机制。 方法:将30只20月龄SD大鼠随机分为假手术组(Sham-operated group,SO组)、缺血再灌注组(IR组)、肾缺血再灌注饱和氢气生理盐水干预组(HS组),每组10只共3组。假手术组接受中线开腹、开腹后切除右肾,左侧肾蒂游离及45分钟后关腹操作,术前6小时经腹腔注射同干预组等量的生理盐水;缺血再灌注组大鼠中线开腹,后切除右肾,游离左侧肾动脉并用无损伤动脉夹钳夹,阻断45分钟后松开动脉夹并关腹,术前用生理盐水的量及方法同假手术组;干预组大鼠如IR组一样制成RIRI模型,术前6小时经腹腔注射饱和氢气生理盐水,剂量为5ml/kg。实验各组均于术前30min肌注青霉素(1万u/100g)预防感染,术后24小时处死动物,采集大鼠静脉血检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清尿素氮(BUN)指标评价肾功能;取左肾采用HE染色并光镜观察各组肾组织的变化;用硫代巴比妥酸法测定肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力,用ELISA方法测定血清8-OHDG水平;用免疫组化法检测肾组织Caspase-3、HO-1蛋白表达的变化;利用RT-PCR技术检测肾组织中Caspase-3、HO-1mRNA的表达水平。 结果: 1.BUN和Scr:显示肾缺血再灌注组和假手术组之间对肾功能的影响存在差异,IR组BUN(13.81±1.516mmol/l VS7.383±0.7136mmol/l)与Scr(189.7±17.17umol/l VS103.4±10.49umol/l)偏高(p0.05),而饱和氢气生理盐水组与IR组比较,BUN(9.729±1.009mmol/l VS13.81±1.516mmol/l)与Scr(143.2umol/l±11.23umol/lVS189.7±17.17umol/l)下降(p0.05),但是氢气干预后BUN及Scr水平仍高于假手术组。 2.MDA与SOD:发现IR肾组织中MDA浓度明显高于SO组(*P0.01,1.569±0.1049nmol/mgprot VS0.7763±0.1323nmol/mgprot),氢气干预组较缺血再灌注组比MDA值下降(#p0.01,1.065±0.1290nmol/mgprot VS1.569±0.1049nmol/mgprot),但MDA值仍比假手术组高。SOD含量中,IR组与SO组比较明显下降(*p0.01,59.68±7.912U/mgprot VS101.4±9.902U/mgprot)而氢气干预组与缺血再灌注组比较(P0.05,93.39±20.99U/mgprot VS59.68±7.912U/mgprot)差异无统计学意义。 3.8-OHDG:检测发现缺血再灌注组8-OHDG水平较假手术组升高(p0.01,2.622±0.1842ng/l VS1.832±0.1375ng/l),氢气干预组与缺血再灌注组相比8-OHDG水平明显下降(p0.01,1.645±0.2203ng/l VS2.622±0.1842ng/l)。氢气水组较假手术组8-OHDG水平下降。 4.光镜观察:假手术组可见部分的肾小球硬化,肾小球基膜增厚,肾小管萎缩;IR组见肾小管扩张、肾小管上皮细胞水肿、部分上皮细胞核溶解、管腔内可见肾小管上皮细胞碎片,余观察同SO组,而H2干预组肾病理改变较IR组明显减轻。根据肾组织损伤评分:氢气水干预组与缺血再灌注组相比组织损伤(0.4850±0.08744分VS0.8050±0.1347分) P0.05;而缺血再灌注组与老龄组假手术组相比损伤明显加重(*P0.05,0.8050±0.1347分VS0.3988±0.09135分)。 5.Caspase-3、HO-1蛋白表达:各组肾组织中Caspase-3及HO-1免疫组化阳性率情况。Caspase-3阳性率中IR组较SO组相比增加且P0.05,HS组与IR组相比阳性率下降且P0.01。而HO-1阳性率测定中,HS组较IR组相比增加且P0.01。 6. Caspase-3、HO-1mRNA表达:通过检测肾组织中Caspase-3及HO-1mRNA水平发现:与假手术组相比,缺血再灌注组Caspase-3表达明显增加(*P0.05,0.002506±0.0004164vs0.001343±0.0002327),氢气水干预组与缺血再灌注组相比表达明显减低(#P0.05,0.001433±0.0001845vs0.002506±0.0004164);而HO-1mRNA表达量,与假手术组相比,缺血再灌注组HO-1mRNA表达增高但P0.05无统计学差异,氢气水干预组与缺血再灌注组相比表达明显增加(#P0.05,0.003928±0.0008032vs0.001763±0.0004366)。 结论:饱和氢气生理盐水对大鼠RIRI具有显著保护作用且该保护作用可能是通过抗氧化作用实现的。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R699.2

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