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《苏州大学》 2018年
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以天然蛋白丝为载体的CTC捕获及其毛细管电泳筛选CTC的核酸适配体

丁海洋  
【摘要】:本文第一部分以天然蚕丝为载体,表面改性后用作捕获器捕获循环肿瘤细胞(CTC),并对其捕获性能进行了研究。基于蚕丝和壳聚糖良好的生物相容性和各自的反应活泼性,尝试将两者联用,采用滴注的方法将壳聚糖覆膜在蚕丝表面,使蚕丝表面带有大量活性氨基,再通过碳二亚胺法依次连接聚丙烯酸(PAA)和核酸适配体(Apt)构建成捕获蚕丝。将其固定在静脉留置针中,前端伸出2厘米改性蚕丝用于捕获。以蠕动泵构建循环系统,模拟体内血液循环,将细胞悬液加入循环体系中考察捕获器的捕获性能。由于此覆膜方法得到的壳聚糖膜在蚕丝上分布较少且不均匀,捕获结束后在覆膜部位可见明显的细胞堆积,而在无膜部位则少见细胞,造成整体的捕获效率不高。为提升捕获效率,利用蚕丝蛋白中氨基酸分子侧链上的氨基和羧基等基团,通过环氧键的开环反应接枝上1,4 丁二醇二缩水甘油醚(MSDS),使蚕丝表面带上一层均匀的活性环氧键,再通过开环反应连接上长链PAA,最后通过碳二亚胺法连接Apt。各步反应均以傅里叶红外变换光谱仪及扫描电镜进行表征。本章重新构建了循环捕获系统用于体外模拟,考察了此改性丝的捕获效率及特异性。此捕获器捕获效率较好,特异性较高。实验中还研究了不同数量蚕丝对捕获效果的影响,发现蚕丝数量越多,捕获效果越好,近似呈指数形式增长,在蚕丝数量足够的情况下,将展现出极强的捕获能力。另测试了该捕获器的细胞毒性和生物相容性,其仅有极轻的细胞毒性,不造成溶血和凝血,说明其具有用于体内捕获癌细胞的潜质。本文第二部分对聚丙烯酰胺凝胶电泳技术与基于细胞的指数富集的配体系统进化技术(Cell-SELEX)联用方法进行了研究,尝试以细胞凝胶毛细管电泳进行靶细胞的核酸适体筛选。实验中捕获器捕获CTC建立在适体识别并结合癌细胞的基础上,一种适体仅特异性识别某种特定的癌细胞,尚有大量的癌细胞有待筛选出各自的特异性核酸适配体。传统的适体筛选耗时较长,且操作复杂,因此本文提出一种新方法,并对该新型的、快速的筛选技术完成了初步的可行性研究,为进一步的研究工作提供了良好的基础。将靶细胞与聚丙烯酰胺胶混合后注入涂层毛细管内,使细胞凝胶在毛细管柱内聚合,以嵌入式荧光激发模式检测信号,将FAM标记的原始文库电进样进入细胞凝胶毛细管柱内电泳分离。对聚丙烯酰胺胶的类型、浓度,电泳电压,和进样时间进行了优化,决定电泳条件为:10%非交联聚丙烯酰胺胶,电泳电压400V/cm,电进样时间20s。在进行方法学验证时发现,由于细胞表面的蛋白种类丰富,数量众多,电泳中同一种ssDNA由于接触到的蛋白种类和数量各不相同,在各个保留时间都有出现,因此并不能简单地根据信号峰的先后判断ssDNA与细胞的亲和力强弱,即亲和力存在差异的ssDNA链无法分开。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R318

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 陈鑫;李卫滨;王开宇;兰小鹏;;Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体[J];临床检验杂志;2012年07期
2 查成喜;韩跃武;张雪燕;杨浩;夏艳;郭鹏;;基于ssDNA适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法的建立[J];中国生物制品学杂志;2011年07期
3 刘玲玲;韩跃武;祝凯华;李真真;韩亚萍;路艳;王春霞;;慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定[J];第四军医大学学报;2009年13期
4 李真真;韩跃武;刘玲玲;韩亚萍;路艳;王春霞;;SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立[J];生物技术;2009年03期
5 张慧卿;方念;张焜和;;适配子筛选技术[J];中国生物工程杂志;2008年01期
6 王成刚;莫志宏;;核酸适体技术研究进展[J];生物医学工程学杂志;2006年02期
7 汪俊,江雅新,方晓红,白春礼;核酸识体的研究及应用[J];物理;2003年11期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 董婉妮;人肺腺癌A549细胞适配体的筛选与鉴定[D];广州医学院;2011年
2 马文静;适体筛选方法及分离方法的探讨[D];西南大学;2010年
3 秦川;SELEX技术筛选青霉素类抗生素适体及其运用方法的初步探索[D];西南大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李诗玉;;核酸适体在生物医学中的应用分析[J];技术与市场;2015年12期
2 候帅;席庆;;适配子在口腔肿瘤诊断和治疗中的应用[J];口腔颌面修复学杂志;2015年02期
3 朴喜航;任姝颖;夏薇;;SELEX技术的研究进展及在医学中的应用[J];吉林医药学院学报;2015年01期
4 赵洁;张琦;王旭;华茜;张子剑;;核酸适体技术在生物医学研究中的应用[J];神经药理学报;2014年06期
5 徐攀;马驰;张雪燕;杨晓娟;蒋丹;聂登梅;刘昕;韩跃武;;早期胃癌中原代细胞ssDNA适配子检测的临床意义[J];实用癌症杂志;2014年09期
6 查成喜;邢福军;张雪燕;郭鹏;习静;韩跃武;;K562细胞ssDNA适配子检测方法对慢性粒细胞白血病诊断价值的研究[J];检验医学;2014年08期
7 徐发良;周琦;匡毅;陈小乐;张海伟;顾长国;;利用细胞-指数式富集的配体系统进化技术筛选肿瘤细胞DNA适配子[J];上海交通大学学报(医学版);2013年12期
8 赵秋伶;张振宇;;基于DNA和小沟结合染料DAPI快速检测水样中Hg~(2+)[J];分析测试学报;2013年12期
9 袁亚利;袁若;柴雅琴;;凝血酶电化学适体传感器[J];化学传感器;2013年04期
10 满燕;吕雪飞;张玉奎;庆宏;邓玉林;;核酸适配体及其在生物医学研究中的应用[J];航天医学与医学工程;2013年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 李洁;基于核酸适配体技术对食品中吊白块的胶体金试纸条研究[D];昆明理工大学;2018年
2 丁海洋;以天然蛋白丝为载体的CTC捕获及其毛细管电泳筛选CTC的核酸适配体[D];苏州大学;2018年
3 李江林;适配体化纳米基底制备及SERS检测啶虫脒和毒死蜱农残的研究[D];华南理工大学;2017年
4 段烨;氯霉素核酸适体的筛选及基于核酸适体生物传感器的建立[D];北京化工大学;2016年
5 陈哲;基于EXOⅢ酶的荧光信号放大探针的高灵敏基因检测及凝胶电泳技术筛选细胞核酸适配体[D];苏州大学;2016年
6 鲍立新;应用CELL-SELEX筛选PANC-1细胞适配体技术研究[D];苏州大学;2015年
7 陈爽;糖胺聚糖活性适体制备及其应用研究[D];浙江工业大学;2015年
8 马文静;适体筛选方法及分离方法的探讨[D];西南大学;2010年
9 陈号;适体筛选过程中检测方法的初步探索[D];西南大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 刘玲玲;韩跃武;祝凯华;李真真;韩亚萍;路艳;王春霞;;慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定[J];第四军医大学学报;2009年13期
2 王谷云;姚红霞;;慢性粒细胞白血病的治疗进展[J];医学综述;2009年13期
3 沈君;王开泰;陆红娟;;慢性粒细胞白血病的诊断与治疗[J];中国实用内科杂志;2008年S1期
4 马占忠;王玉炯;秦莲花;丁元生;谢琴;胡忠义;;筛选结核分枝杆菌CFP-10抗原适体的研究[J];中国病原生物学杂志;2008年02期
5 姚尔固;慢性粒细胞白血病的诊断与治疗[J];白血病.淋巴瘤;2002年05期
6 詹林盛,孙红琰,彭剑淳,邵宁生,王全立;丙型肝炎病毒核心蛋白寡核苷酸适配子的筛选与鉴定[J];中华微生物学和免疫学杂志;2002年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 秦川;SELEX技术筛选青霉素类抗生素适体及其运用方法的初步探索[D];西南大学;2008年
2 刘晓静;SELEX技术筛选人TGF-β RⅡ亲和核酸库方法的建立[D];第三军医大学;2004年
3 郭克泰;肿瘤坏死因子的寡核苷酸拮抗剂的筛选及其功能研究[D];安徽医科大学;2003年
【相似文献】
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1 许涛;彭智辉;王泽峰;周佳琪;邓乐;;核酸适配体筛选技术研究进展[J];生物技术通讯;2018年01期
2 汪靖;王进;曾家豫;;核酸适配体结合蛋白质靶标的亲和力表征方法及其在疾病诊断中的应用[J];中国生物化学与分子生物学报;2018年04期
3 李亚楠;赵洁;张傲哲;谭琰;华茜;张子剑;;核酸适配体的体外筛选方法的最新研究进展[J];生物技术通报;2017年04期
4 胡涛;杨帆;杨秀荣;;双偏振极化干涉技术实时研究三磷酸腺苷与其适配体相互作用[J];分析化学;2017年07期
5 刘洪美;栾云霞;陆安祥;陈佳祎;李成;王纪华;;核酸适配体在小分子目标物快速检测中的应用[J];食品安全质量检测学报;2017年08期
6 陈尔凝;赵新颖;屈锋;;细菌的核酸适配体筛选的研究进展[J];色谱;2016年04期
7 ;中科大筛选出特异针对点突变蛋白的适配体[J];中国科学院院刊;2015年05期
8 ;中国科学技术大学筛选出特异针对点突变蛋白的适配体[J];中国材料进展;2015年Z1期
9 仲津漫;刘鸽;文娣娣;宦怡;任静;;前列腺癌适配体的研究进展及其应用[J];现代生物医学进展;2015年29期
10 董理权;吴小高;;构建辅助器具适配体系探讨[J];残疾人研究;2014年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 屈锋;杨歌;魏强;胡猷浩;;核酸适配体三维度筛选策略初探[A];中国化学会第十一届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会(材料分析与其它分会)论文摘要集[C];2016年
2 王开宇;林建敏;兰小鹏;;基于适配体茎环开关和链置换放大技术的铅离子荧光适配体传感器[A];第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2015年
3 林雪霞;林金明;;可控核酸适配体-芯片毛细管电泳用于细胞代谢物的研究[A];第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集(第二分册)[C];2015年
4 上官棣华;邴涛;刘祥军;乞萃;梅宏成;张楠;常天俊;杨晓娟;;用于高选择性分离分析的核酸适配体研究[A];中国分析测试协会科学技术奖发展回顾[C];2015年
5 王梁华;胡波;郑欣;高顺祥;刘德婧;孙铭娟;焦炳华;;建立海洋生物毒素适配体筛选与优化技术平台[A];全国第九届海洋生物技术与创新药物学术会议论文摘要集[C];2014年
6 陈巍;赵新颖;屈锋;;毛细管电泳法筛选蛋白质的核酸适配体的初步研究[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
7 马文韬;古力;屈锋;;毛细管电泳筛选大肠杆菌适配体的初步研究[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
8 杨晓娟;邴涛;梅宏成;上官棣华;;核酸适配体用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
9 蔡圣;刘彩云;卢建忠;;基于核酸适配体和酶循环放大的腺苷化学发光检测[A];中国化学会第十届全国发光分析学术研讨会论文集[C];2011年
10 郑冬梅;娄新徽;;一种基于结构开关型适配体的无标记荧光传感法[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 潘文;核酸适配体在医药领域应用前景广阔[N];中国医药报;2010年
2 黄旻 殷向佳;走在分子抗癌的路上[N];团结报;2015年
3 于洋 田野;蛋白质检测有了新方法[N];吉林日报;2011年
4 本报记者 谢水旺;陆金所首席风控官杨峻:信用评级等传统风控技术仍是最有效的[N];21世纪经济报道;2016年
5 记者 吴长锋 通讯员 周慧;重金属超标实现快速实时检测[N];科技日报;2016年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 应站明;遗传编码核糖核酸生物传感新方法研究[D];湖南大学;2018年
2 程莉娟;功能核酸控制沙门氏菌致病性的研究[D];湖南师范大学;2018年
3 朱泽策;金属配合物发光探针与核酸传感器的设计、合成及性能研究[D];武汉大学;2014年
4 李潮;基于适配体的微梁阵列生化传感技术研究[D];中国科学技术大学;2018年
5 王亚;基于核酸适配体及碳点的荧光分析方法构建及应用研究[D];华东师范大学;2018年
6 白琛俊;类CAR多价适配体的构建及其激活T淋巴细胞并靶向杀伤肺癌细胞的初步应用&H1N1甲型流感病毒特异性适配体的筛选与鉴定[D];军事科学院;2018年
7 李旭;消化系统肿瘤相关危险因素及适配体在其诊断及靶向治疗中的作用[D];吉林大学;2018年
8 黄玉坤;基于核酸适配体识别-时间分辨荧光纳米探针的生物毒素检测方法研究[D];江南大学;2015年
9 陈秀娟;镰刀菌毒素核酸适配体的筛选及分析应用研究[D];江南大学;2015年
10 王成全;基于磁控适配体传感体系的农产品中典型霉菌毒素检测研究[D];江苏大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 丁海洋;以天然蛋白丝为载体的CTC捕获及其毛细管电泳筛选CTC的核酸适配体[D];苏州大学;2018年
2 陈虹妃;基于适配体识别作用的前列腺肿瘤外泌体的电化学信号放大检测[D];南京师范大学;2018年
3 赵静;核酸适配体应用于乳制品中抗生素残留比色检测研究[D];贵州大学;2018年
4 邹颖;不同生长期大肠杆菌O157:H7适配体的筛选及应用研究[D];江南大学;2018年
5 谢晓慧;适配体修饰核壳纳米材料表面增强拉曼光谱检测17β-雌二醇方法研究[D];华南理工大学;2018年
6 孟云;基于聚集诱导发光的真菌毒素和金属离子检测新方法研究[D];石河子大学;2018年
7 赵旭;重金属镉离子可视化检测方法研究[D];江南大学;2018年
8 刘丽红;真菌毒素快速检测适配体试纸条的研究[D];江南大学;2018年
9 李洁;基于核酸适配体技术对食品中吊白块的胶体金试纸条研究[D];昆明理工大学;2018年
10 韩旭艳;氨基糖苷类抗生素特异性单链DNA适配体的筛选及其应用研究[D];江南大学;2018年
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