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《苏州大学》 2001年
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人树突状细胞体外诱导扩增的影响因素及优化方案

朱一蓓  
【摘要】: 树突状细胞(DC)是机体内最重要的一群专职性抗原递呈细胞(APC), 也是机体免疫应答的有力启动者。近年来,随着DC的功能和生物学特性被 不断认识,DC在肿瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人们的重 视,被运用于B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌、转移性肾癌和多发性骨 髓瘤等恶性肿瘤的临床尝试性治疗,并取得了令人鼓舞的疗效。 DC的前体细胞来源于骨髓造血干细胞,继而这些前体细胞经血流到达外 周组织,分化为幼稚的DC。这些DC可以通过胞吞作用摄取入侵的抗原物质, 加工、处理成小分子的多肽片段,再把这些多肽片段与MHC分子结合,表 达在细胞表面,然后DC离开抗原入侵的部位,进入淋巴组织,定居于淋巴 结的T细胞区。在迁移的过程中,DC发生一系列的变化,逐渐失去摄取抗 原的能力,上调表达协同刺激分子。成熟的DC在淋巴结与T细胞相互作用, 其表面的抗原肽-MHC分子复合物被T细胞表面受体(TCR)识别产生抗原 特异性信号,同时DC胞膜上表达的协同刺激分子与T细胞表面的相应分子 摘 要 结合,给T细胞提供协同刺激信号。此外,DC还分泌一些细胞因子,如 IL. 12、ILl、IL七等,使T细胞进一步活化、增殖和产主针对相应抗原的细胞 免疫应答。这一系列复杂而精细的过程,是在一些生物因子的作用下完成的, 因此进一步探讨调节DC分化、生长和成熟的生物因子和影响因素及其机制, 将有助于DC为佐剂的生物治疗的开展。 一.细胞因于对DC {E@fd&的峨 由于 DC在外周血的含量极低(仅占单个核细胞总数的 0.5l%人 sot分 离纯化,不能满足DC的实验研究及临床应用的需要,如何在体外大量扩增DC 一直是DC研究的热点。本研究首先比较了INF仓、FL、sCD40L、gp 130等 不同细胞因子对DC的诱导扩增效应,通过对所扩增DC的数量、细胞表型、 激发同种混合淋巴细胞反应的能力、分泌的 ILl 的含量、抗原摄取能力、 对 T细胞的趋化能力及对 IL刁 的桔抗效应的测定和分析,为进一步探讨 DC 体外诱导扩增的优化方案寻找可行的细胞因子组合。结果显示:*)SCD4() 和TNF仓都具有促进n姚、成抉的能力,可以有效地使DC上调表达协 同刺澈分子CD80、CD86并进而促进DC激发T细胞槽殖和活化的功能,但 在体外培养嫡中,sCD40L能有℃凶妨奇肮thlo的扔啼赔①宽,而TNF{则明 显不如SCD40L舰。Q)激发型gp130单克隆抗体和人重组F’L可以显著地 促进DC的助洲,但是无明显地促进DC分 熟和促进DC激发T细胞 的功能。Q)经sCD40L和TNFa tX)8的DC均脐撇衅的IL-12, 抗原摄取删明显下降,对T淋巴细胞的趋化作用显著增强,以SCD40L的作 用强于TNFa。sCD40L在体外激发扩增DC以及以DC为主体的肿瘤免疫治 疗中具有独特的作用。 H.Y燃对DC生物学效应的作用 一定剂量的电离辐射可以对机体的多种器官和细胞产生损伤作用,而长期 4 摘 要 以来电离辐射对DC的损伤效应被人们所忽视,己有研究表明,电离辐射所 致恶性疾病的发生可能与DC数量或功能的改变有关。因此我们探讨了Y射 线对DC体外分化成熟及功能的影响,获得如下几个方面的结果:O)可射 线照射抑制DC M体外槽阻,显看地下调DC表这GM-CSFRm 和gP130分 子,但能上调*C表达CD so、CD 86和*L中*R分于;Q)可射线照射增强 *C汲发T细胞的增殖;o)可射线照射能抑制*C对抗原摄取的敝。在实 验中我们首次发现经过照射的DC上调性表达协同刺激分子,同时也可以相 应地提高DC对T细胞的激发作用。因此,电离辐射可以促进DC的成熟, 其在免疫应答中的作用及可能性机制值得进一步探讨。 三.DC懒怖增的优化方案 通过对上述结果的综合分析,我们建立了在体外以GM(SF、IL*、FL 和 SCD40L为组合的诱导扩增DC的优化方案,并在此基础上,进一步研究了 无血清培养基对DC分化发育的影响。实验结果表明,经无血清培养基诱导 扩增的DC的成熟度可能不够。鉴此,如何进一步优化无血清培养基条件: 如再添加一些必要的细胞因子如 Ah、PGEZ、IFN叶等或适量的自体血浆, 人AB型血清,值得进一步研究。 完善的DC诱导和培养体系是DC研究和应用的基础。为了有效地扩增DC 并增强其生物学功能,寻找合适的细胞因子配伍及应用顺序具有重要的应用 价值。本研究在探讨各种细胞因子及不同剂量的电离辐射对DC的生物学效 应的基础上,建立了人
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392.12

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