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《苏州大学》 2001年
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人重组白介素13在毕氏酵母中的表达及其体外诱导DC分化作用的研究

江阳  
【摘要】: 白细胞介素13是在1993年被命名的一种由活化T_H2细胞分泌的细 胞因子。其生物学活性与白细胞介素4有许多相似之处,可抑制单核细 胞释放炎症因子;促进B细胞繁殖和转化;抑制HIV-1病毒的复制和肿 瘤的生长,对某些上皮细胞瘤具有高度毒性。临床上IL-13在许多疾病, 特别是在变态反应性疾病,如哮喘的病理发展过程中有重要作用。鉴此, 其在实验和临床应用中的作用倍受关注。 为了获得高效表达人IL-13的表达菌株,生产具有生物学功能的 IL-13,并研究其在体外诱导DC的作用,我们应用毕氏酵母表达系统表 达人重组IL-13,经分离纯化后,对其生物学活性进行测定,并就其在 体外诱导DC的作用及机制进行研究。 一.重组人IL-13在毕氏酵母中的表达 我们根据文献报道的人IL-13基因序列,并充分考虑到酵母菌蛋白 质合成时密码子的偏爱性,在不改变IL-13蛋白质序列的前提下,人工 合成6条IL-13基因片段和5条连接片段,经加磷反应、连接反应、PCR 后获得两条大片段,再用TaqDNA多聚酶经PCR扩增,形成人工IL-13 的全长片段,将其连接至克隆载体pSK中,测序正确后,再将IL-13基 因片段连接至酵母表达载体pPICZαA,获得用于酵母表达IL-13的重 组质粒pPICZ α A-IL-13。用SacI酶切重组质粒pPICZ α A-IL-13使其 线性化,再电转化至毕氏酵母菌株GS115中,经Zeocine加压筛选后, 获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株。应用全自动 发酵装置进行发酵,表达上清中目的蛋白的表达量达25mg/L。对上清 经透析、超滤浓缩、上柱,分离纯化获得高浓度的IL-13蛋白质(纯度 >95%)。 — — 二-H3的……的 根据报道我们用民l;细胞株来检测毕氏酵母表达的人重组IL13与 标准品几习3,结果表明我们用毕氏酵母表达的人重组ILl3达到标准 品生物学活性要求,以剂量依赖的方式刺激BHl细腑增殖。ILl3与 IL一在许多生物学功能上相似,ILA在体外可诱导外周血单核细胞向 DC转化中有重要作用,因此我们考虑用ILl 来替代几个体外诱导DC。 实验发现ILl3也同样有体外诱导外周血单核细胞向DC增殖分化的作 用,表型分析 MHCll、CDIa、CD80、CD83、CD86等 DC指标和混合淋 巴细胞反咖激T细胞增殖的作用与几A诱导得的成熟DC并无显著差 别,未成熟比的摄取抗原的能力也很强。因此几l 为体外诱导DC提 供了一条有效途径。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392.11

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