周围神经及神经干细胞移植修复治疗损伤脊髓的实验研究

【摘要】： 目的：本课题旨在研究周围神经移植及异体胚胎神经干细胞移植 修复治疗损伤脊髓的影响因素及疗效，探讨实验研究中周围神经移植 合适的脊髓损伤动物模型，合理的周围神经的取材来源、桥接方式； 损伤局部脊髓再生的适宜环境条件，神经营养因子的影响及神经干细 胞移植后在损伤脊髓中的成活、分化、迁移状况和对神经功能的影响 等尚无定论的问题，力求探索出对损伤脊髓较为有效的治疗方法。 方法：1、周围神经移植：用SD大鼠由胸_8、胸_9平面剪除半侧4mm 长脊髓组织，制成脊髓半切模型，由两侧第九第十肋下方分离出肋间 神经，以6-8束肋间神经按近端白质-远端灰质及近端白质-远端白质 的不同的桥接术式，修复脊髓缺损处，并在术后早期在局部使用神经 生长因子和脑源性神经营养因子，对照组以可吸收明胶海绵填充。术 后受试鼠笼养观察，以多种手段从功能及结构两方面监测脊髓的再生： 受试鼠详细的行为学观察，斜板试验，改良Tarlor评分；体感诱发电 位和磁刺激运动诱发电位监测脊髓感觉及运动电位传递；常规切片， 光镜观察及扫描、透射电镜观察植入区组织结构；以神经示踪剂（麦 胚凝集素-辣根过氧化物酶）显色观察轴突的生长及功能恢复；以免疫 组化方法，检测神经胶质原纤维酸性蛋白及饱和硫蛋白阳性细胞，并 以图像分析计数细胞密度，分析植入区细胞成份；以磁共振对脊髓结 构扫描观察等。 2、神经干细胞移植：由胚胎14天SD鼠大脑海马区取脑组织培养 出神经干细胞，经传代、以5溴尿嘧啶标记，鉴定后植入按Allen方 法制成的不同重量打击的脊髓中。受试鼠笼养观察，以同前的各种方 法观察神经干细胞在损伤脊髓中的存活、分化及迁移以及对功能恢复 的影响。 结果：1、周围神经移植后动物神经功能的恢复优于对照组；不同 周围神经及神经干细白移植修复治疗损伤脊回的实验研究．中文拘要． 的桥接术式之间无明显差别；脊髓的感觉、运动电位能传达到损伤的 远端，示踪剂能通过植入区近远端界面，植入神经与脊髓融合，神经 纤维通过吻合日长入神经内并通过近远端界面。 2、神经干细胞在损伤脊髓中能成活，并分化成为神经元及神经胶 质细胞及形成联系，分化倾向于神经元，并能主动迁移Icm距离。神 经示踪剂能被运输到挫伤以远区域，运动电位能传达到损伤区的远端。 结论：脊髓半切模型是研究周围神经植入的合适模型，肋间神经 是合适的周围神经植入材料及白质－白质是合理的周围神经桥接术式， 用周围神经移植叶经营养因子的早期使用能明显提高脊髓结构的重建 及功能的恢复。异体胚胎神经干细胞移植能在损伤区替代受损的神经 元及胶质细胞，形成突触联系，促使脊髓功能一定程度提高。