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《苏州大学》 2001年
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FasL、p21~(WAF1/CIP1)和B7-1基因对胃癌细胞系生物学行为影响的实验研究

郑世营  
【摘要】: 第一部分:腺病毒介导FasL基因转移诱导胃癌细胞凋亡 目的:探讨FasL基因诱导人胃癌细胞凋亡以及基因治疗胃癌的可能 性。方法:构建重组腺病毒载体,将FasL基因转移到不表达或低水平表达 FasL的人胃癌细胞系(SGC-7901等5株细胞),对FasL基因的表达,细 胞生长的抑制和对肿瘤生长模型的治疗效果进行分析。结果:1)成功地 构建FasL重组腺病毒(Ad-FasL)和对照病毒Ad-LacZ,基因转染:2)经两 周的筛选得到G418抗性克隆即转基因的细胞克隆(SGC-7901-FasL)和空 载体克隆(SGC-7901-vect);3)在蛋白质水平上,通过FACS分析转染 FasL的G418抗性细胞获得FasL稳定表达;同样分析转染Ad-LacZ的 G418抗性细胞克隆未获得FasL的表达;4)在mRNA水平上,提取细胞 总RNA,根据设计引物,通过RT-PCR,扩增FasL胞外区基因片段,鉴 定出FasL基因在细胞上的稳定表达;5)SGC-7901细胞感染FasL后,两 天出现细胞变圆,细胞浆出现空泡,随即脱落死亡。MTT法检测FasL 感染的SGC-7901细胞表明FasL有抑制肿瘤细胞生长的作用,其生长抑 制率为84%。集落形成能力检测证实FasL感染的SGC-7901细胞无集落 形成;6)FACS检测证实,转染FasL基因后,SGC-7901细胞S期和G_2 期比例下降,G_1期比例增加,表明FasL基因能抑制胃癌细胞的增殖,并 且有明显的凋亡峰出现(即亚G_1峰),也表明FasL基因有诱导SGC-7901 细胞凋亡的作用;7)DNA凝胶电泳示有典型的DNA梯状条带;8)Ad-FasL 对SGC-7901裸鼠皮下移植瘤模型生长抑制率为34%。结论:FasL基因 Fds卜、pZI——’‘””和 B7-14@对胃g细胞系生物学行为影响的实验研究 中义摘妄 参与了肿瘤细胞凋亡的诱导,并抑制肿瘤细胞的增殖,最终能抑制肿瘤 细胞的生长。因此,FasL基因仑肿瘤的基因治疗上有广泛的应用前景。
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