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《苏州大学》 2002年
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B7-1基因转染肝癌细胞的实验研究

张勇  
【摘要】: 背景 实质性肿瘤的免疫应答,主要依靠T淋巴细胞的参与,而T淋巴细胞的激活需要双信号系统提供的刺激,包括T淋巴细胞表面的TCR和APC递呈的MHC-抗原肽的结合所提供的第一信号和由共刺激分子结合提供的第二信号。如果缺乏共刺激分子提供的第二信号,将导致T淋巴细胞的无反应或凋亡。肝癌被认为是一种弱免疫原性的恶性肿瘤,肝癌细胞表面缺乏足够的可以与淋巴细胞表面CD80/CTLA-4等结合的配体,主要是指B7-1(CD80)和B7-2(CD86),其中缺乏B7-1分子的表达是其无法提供第二信号的重要原因。我们希望通过基因转染的技术手段达到提高肝癌细胞表面的B7-1分子表达水平,恢复其传导第二信号刺激的能力,从而诱导特异性抗肿瘤免疫反应的目的。为此,我们进行了以下的实验研究。 1.通过逆转录病毒载体将hB7-1基因转染人肝癌细胞,建立B7-1分子高表达的阳性克隆。 2.观察B7-1分子的表达对淋巴细胞增殖的影响,以及在诱导CTL细胞杀伤效应中的作用。 目的 检测肝癌细胞B7-1分子的表达及其mRNA水平,通过逆转录病毒载体建成B7-1分子高表达的阳性克隆。观察转染了B7-1基因后肝癌细胞生物学特性的变化以及B7-1分子对淋巴细胞增殖的影响,评价B7-1分子在特异性抗肿瘤免疫反应中的作用。 方法 通过逆转录病毒载体介导B7-1基因转入HepG2细胞,流式细胞仪(FCM)检测HepG_2和HepG_2/hB7-1细胞表面B7-1分子的表达水平,RT-PCR检测HepG_2细胞B7-1mRNA的水平。观察HepG_2和HepG_2/hB7-1细胞的生长曲线。用MTT法检测瘤苗对淋巴细胞增殖的影响,用LDH法评价B7-1的表达对CTL杀伤效应的影响。 结果 HepG_2细胞表面B7-1分子表达水平低,其阳性率为3.66%。PCR检测显示B7-1mRNA荧光强度极低,与FCM的结果相 IB7.l基因转染肝癌细胞的实验研究 摘要 l 对应。而 HepG。儿B7l的 B7一分子阳性表达率达到 92石O/O,转染 B7l 基因后较转染前提高了25倍多。HepG。和HepG/hB7*的生长曲线 D 相比,后者生长曲线上升减缓,生长速度减慢。B7l分子的表达促进 了淋巴细胞的增殖,在 E/T=10:l时,较对照组增大 1.73倍。同时, B7上的表达大大增强了CTL对HepG。儿B7l的杀伤作用,较对照组 差异有显著性帅叼.01人 结论1.HePG。表面B7上分子的低水平表达是其弱免疫原性 的主要原因。 2.逆转录病毒载体介导B7l基因转染HepG。可以获得 B71高表达的阳性克隆。 3.B7d基因的转染可以降低肝癌细胞的恶性表征 4.B7*分子的表达不但可以促进淋巴细胞的增殖,而 喜 且还增强CTL细胞对肝癌细胞的杀伤作用,但只有在兔疫细胞占优 势的情况下,CTL细胞兔疫杀伤的整体效应才能有效显现。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.7

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【参考文献】
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