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《苏州大学》 2002年
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鼠抗人Sydecan-1(CD138)单克隆抗体的研制及生物学特性的研究

孙万平  
【摘要】: Sydecan-1(CD138)分子是跨膜粘结蛋白聚糖家族成员,由胞浆段、跨膜段和胞外段组成。Sydecan-1主要通过胞外段HS侧链可与细胞外一系列配基结合,如粘附分子、基质成分肝素结合生长因子、酶和酶抑制物及某些血浆蛋白等,以共受体方式调节细胞与微环境之间的相互作用,参与组织器官分化发育、血管形成和组织再生等一系列生理过程的调节。 目前,对Sydecan-1分子的研究主要集中在Sydecan-1分子的表达与恶性实体瘤细胞生长、转移和预后的关系。目前,许多肿瘤如多发性骨髓瘤、肝癌、乳腺癌和鳞状细胞癌已将Sydecan-1分子表达的降低作为癌细胞进一步恶化和转移的标志。因此,Sydecan-1分子可作为肿瘤疾病预后的一个重要指标。鉴此,进行Sydecan-1分子的单克隆抗体(mAb)的研制及利用Sydecan-1分子的mAb研究Sydecan-1分子的表达与肿瘤细胞作用机制的研究是很有必要的。同时,Sydecan-1分子的mAb的研制对进一步开展用于检测Sydecan-1分子的试剂盒的研制工作提供必要的前提。 本研究的目的:获得鼠抗人Sydecan-1分子的单克隆抗体(mAb),同时,利用研制出的Sydecan-1 mAb进一步研究 抗人 Sydecan-l单克隆抗体的制备及其生物学功能研究 摘要 Sydecan八分子的表达对肿瘤细胞的作用。实验方法:()以高表 达人Sydecand分子的多发性骨髓瘤细胞株8226为免疫原,兔疫 Balb汇小鼠;Q)采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫的小鼠脾脏细 .胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合;u)通过间接免疫荧光标记对杂 交瘤细胞株进行筛选;门)Illi’b识别抗原位点的竞争抑制实验测 定InAb与PE-直标单抗的位点的关系;3)采用常规方法制备染 色体,对杂交瘤细胞进行核型分析:“)采用免疫亲和层析法对腹 水型mAb进行纯化;()快速试纸鉴定mAblg类型;3)采用 间接免疫荧光标记法测定单克隆抗体的效价;乃)单克隆抗体对骨 髓瘤细胞XG叶、XG《的生长抑制试验。实验结果:获得一株鼠抗人 Sydecan*分子的单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为4B3,其染色体 ;数大于100条,经体外长期传代培养,液氮冻存半年以上反复复苏 良好,分泌特异性抗体性能稳定。4B3分泌的InAb识别位点与两种 单抗BB4和M15识别位点相同或相近,重链属IgGI亚类,轻链为 。型,纯化后腹水中 InAb蛋白的得率为 2.gmg/ffil,加入 4B3InAb后 的XGd、XG七细胞体外生长受到抑制,由此表明,4B3为功能性抗 人sydecanl单克隆抗体,这对研究sydecan叶分子的生物学特性 具有重要的价值。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R392.11

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