人IL-24基因的克隆、表达及活性鉴定

【摘要】：目的：克隆人IL-24基因，在原核和真核系统中进行重组表达并检测表达蛋白的生物学活性。 方法：采用RT-PCR技术克隆人IL-24基因。将其重组到pUC19质粒，经测序鉴定后，构建重组质粒pBV220-hIL-24和pcDNA3-hIL-24。经鉴定后分别导入原核和真核细胞进行表达。然后分别用SDS-PAGE、MTT、RT-PCR、FCM、TUNEL及ELISA等方法鉴定hIL-24基因的表达和研究表达产物的功能及生物学活性。 结果：成功获得621bp的人IL-24基因，序列测定结果与GenBank报道的完全一致，原核和真核重组表达质粒构建正确，原核表达产物经透析复性和初步纯化后，通过MTT、TUNEL和FCM等方法检测发现所表达的rhIL-24具有诱导A549肺腺癌细胞凋亡的作用。结果显示hIL-24基因不仅可在COS-7和CHO两种细胞中表达，而且表达的rhIL-24具有较强的诱导A549肺腺癌细胞凋亡的作用。 结论：该基因系国内首次获得并经序列测定证实的hIL-24基因。为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及开发具有自主知识产权的抗肿瘤基因重组蛋白和基因治疗载体的国家Ⅰ类新药奠定了实验基础。