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《苏州大学》 2005年
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HChEGF在原核和真核中的高效表达及应用研究

陈淼  
【摘要】:表皮生长因子(EGF)是一个小分子多肽,具有多种生物学效应及临床应用价值。 本研究依据hEGF 基因的序列,参照家蚕密码子的偏爱性,适当参照大肠杆菌的优选密码子设计并合成了与hEGF 基因序列不同的HChEGF,该序列能编码同hEGF 基因完全一致的氨基酸序列。 将HChEGF 基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌中获得了与组氨酸融合的高效表达。HChEGF 是天然hEGF 基因表达水平的700 倍,产物占菌体总蛋白的30%以上,Western blot 显示在10kDa 附近有一条特异条带。通过金属鏊和亲和层析,获得了电泳纯的目的蛋白。 将HChEGF 基因克隆进pBacPAK-His(1),获得了杆状病毒转移载体pBacPAK—His(1)-HCEEGF,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6 共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR 检测,获得了重组病毒Bm.BacPAK—HChEGF。SDS-PAGE 检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫、蛹的血淋巴中可以检测到一条分子量约为10kDa 的特异性条带。EIASA检测显示,随着时间的延长,表达量逐渐增加,120h 为33.07gg/mL 蛹血淋巴。 家蚕表达的hEGF 对原代培养的大鼠乳鼠的肾细胞的生长有明显的促进作用;动物试验表明,检查口服蚕蛹表达hEGF 的SD 大鼠,其血液中有较高水平的hEGF,并且对酸诱导的急性胃粘膜损伤有明显的修复作用。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q78

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