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《苏州大学》 2005年
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重组人IZ-CD40L在大肠杆菌中的高效表达和生物学活性的鉴定

周璇  
【摘要】:CD40配体(CD40 ligand,CD40L)通过与其受体CD40的相互作用在T细胞依赖的体液和细胞免疫中发挥重要的作用。本实验克隆了CD40L胞外功能区(E107-L261)基因,并在其N端融合了异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)促使其形成三聚体活性形式,同时为了后期纯化的需要,在IZ的N端融合6个His,将所融合得到的IZ-CD40L克隆进入pET30a表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达体系进行诱导表达。结果表明,重组蛋白IZ-CD40L以包涵体形式在大肠杆菌(BL21)中得到较高水平的表达。通过蛋白的变性、复性和HiTrap~(TM)亲和层析获得了纯度达95%以上的IZ-CD40L重组蛋白。经凝胶过滤层析和非还原SDS-PAGE分析,验证了其确系三聚体形式。激光共聚焦实验结果表明,重组蛋白IZ-CD40L可与多发性骨髓瘤细胞株XG2表面CD40分子结合,并促使其在膜表面发生聚集。体外活性实验结果表明,重组蛋白IZ-CD40L可有效促使Dentritic cell(DC)成熟,表现为DC膜表面CD83、CD86、HLA-DR分子上调表达,分泌IL-12增加,以及抗原摄取能力明显下降。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

【共引文献】
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