收藏本站
《苏州大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基质金属蛋白酶-2的基础与临床研究

胡晓慧  
【摘要】:基质金属蛋白酶-2 (MMP-2) 是由Huhtala P.等人在1990 年克隆表达的,其结构中含有信号肽、前肽、催化区、纤维连接蛋白样区域及血红素结合样区域。人类MMP-2基因编码分子量约72kd 的酶原,经活化后水解为65kd 的活性形式。MMP-2 是降解细胞外基质骨架蛋白Ⅳ型胶原主要酶之一,其生理功能主要是参与伤口愈合,生殖以及生殖器官的复旧等。研究发现MMP-2 与肿瘤的侵袭和转移、自身性疾病自身免疫性疾病、牙周疾病以及肿瘤组织的血管生成密切相关。鉴于MMP-2 的重要病理生理功能,本研究旨在基础和临床两方面对MMP-2 的功能作进一步探讨。通过在体外表达MMP-2 所特有的结构域,我们制备出抗MMP-2 的特异性单克隆抗体, 利用所制备的单克隆抗体初步建立了检测血清/浆MMP-2 水平的试剂盒,并且对正常人及良恶性肿瘤病人血清MMP-2 水平进行了测定和比较,这为检测MMP-2 提供了一个有效的工具;运用RNA干扰(RNAi)技术对MMP-2 基因进行基因沉默,更进一步揭示了MMP-2 的功能及可能的作用机制;同时对基质金属蛋白酶在慢性粒细胞性白血病,这一特殊类型的肿瘤中的作用进行了初步探讨。 1. MMP-2 单克隆抗体制备及功能研究 目前发现的基质金属蛋白酶所有成员的结构中都含有三个共同的结构域:1 催化区2 氨基端3 羧基端。此外基质金属蛋白酶-2(MMP-2)还有一个特有的区域,即纤维连接蛋白样区域,研究认为它所参与形成的空间结构决定MMP-2 与底物的连接,只有首先与底物连接,进而才可能发挥酶的活性作用。因此,这一环节的阻断,对抑制内皮细胞和肿瘤细胞的侵袭和转移等有重要意义。 我们根据GenBank 中MMP-2cDNA 序列设计引物,体外培养EA hy926 内皮细胞,收集细胞后抽提总RNA,利用所合成引物经RT-PCR 获得纤维连接蛋白样片段cDNA,与pET20b(+)表达载体重组后转化大肠杆菌BL21(DE3)plus,挑选阳性克隆后,经IPTG诱导表达蛋白。蛋白经次氮基三乙酸镍琼脂糖(Ni-NTA agarose)柱纯化浓缩后免疫Balb/c 小鼠,尾静脉加强后取脾细胞融合,ELISA 法筛选阳性克隆,制备腹水。运用Western blot 对抗体进行鉴定,并观察抗体与天然MMP-2 及纯品的反应情况, 进行亚型鉴定,组织特异性鉴定同时进行功能实验:增殖实验、侵袭实验以及体外血管新生实验。结果显示:原核表达MMP-2 纤维连接蛋白样片段大小为21kd,表达量占菌体总蛋白25%,经Ni-NTA agarose 柱纯化后,获得了部分纯化的蛋白。小鼠脾细胞与杂交瘤细
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R730.2;R341

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡晓慧;范磊;阮长耿;;RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究[J];中国实验血液学杂志;2008年02期
2 周治平;李强;杨晓苏;谭利明;王爱岳;杨国帅;;HIF-1α和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达[J];国际病理科学与临床杂志;2008年05期
3 冯秀元;李鸣媛;谭维羚;沈江山;;灯盏花素对人脐静脉内皮细胞增殖及基质金属蛋白酶-2的影响[J];江西医学院学报;2008年03期
4 杨树艳;杨宝丽;李少华;;基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9与卵巢上皮性癌血管生成的关系[J];中国现代医学杂志;2011年22期
5 索新;郭永川;郭晓峰;石蕊;李朝晖;;垂体腺瘤中基质金属蛋白酶-2、层粘连蛋白受体基因蛋白的表达与侵袭性的关系[J];中国实验诊断学;2008年02期
6 王学忠;章萍;王岳松;钱钧;洪小苏;陈建昌;焦阳;;基质金属蛋白酶-2在高血压大鼠心脏中表达的意义及氨氯地平对其的影响[J];临床心血管病杂志;2006年06期
7 李百文;沈强;潘勤聪;袁胜忠;陈风媛;;胃癌不同临床病理分期中环氧合酶-2与基质金属蛋白酶-2的表达及其相关性[J];复旦学报(医学版);2007年01期
8 于鸿;李亮;高冉;姜琳;陈琦;;转染Smad4基因的人胰腺癌细胞PCNA-1 MMP-2及TIMP-2表达的改变[J];济宁医学院学报;2008年03期
9 张海伶;郭文有;路荣海;张信;;大肠癌中MMP-2、TIMP-2基因的表达及其对预后的影响[J];中国现代医药杂志;2007年03期
10 何金兰;刘玉琼;;c-Met及MMP-2在子宫内膜异位症在位子宫内膜的表达及意义[J];临床医学;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡晓慧;基质金属蛋白酶-2的基础与临床研究[D];苏州大学;2005年
2 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
3 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
4 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
5 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
6 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
8 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
10 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王明月;IL-1α及MMp-2在退变腰椎间盘中的表达及意义[D];中国医科大学;2007年
2 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年
3 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年
4 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年
5 郑杰;分泌抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年
6 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年
7 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年
8 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年
9 贾娟娟;抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年
10 李彬;TLR4单克隆抗体诱导同种心脏移植免疫耐受的研究[D];苏州大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026