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《苏州大学》 2005年
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1,25-(OH)_2D_3作为生物活性因子在组织工程骨中的应用

李涛  
【摘要】:第一部分 人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞的体外培养 目的 探讨人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞体外培养及扩增 的方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法 抽取健康成人骨髓, 梯度离心法获得单核细胞。用含体积分数为10%小牛血清的RPMI-1640作为培 养液,于37℃恒温,5%CO_2浓度,饱和湿度培养箱培养。传2代人骨髓间质干 细胞加诱导液(RPMI-1640完全培养液中含地塞米松10~(-8)mol/L、甘油磷酸钠 10mmol/L、维生素C 50mg/L)诱导成为骨髓间质成骨细胞。无菌条件下取新鲜脐 带,胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞,当原代培养细胞80%以上汇合 后,用胰蛋白酶消化传代。分别对两种细胞进行鉴定。结果 体外培养的人骨 髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞生长良好,表现出各自较典型的形态特 征。骨髓间质成骨细胞用诱导液连续培养14天,在倒置显微镜下观察到明显的 矿化结节形成;脐静脉血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色阳性。结论 人骨髓间质成骨细胞及脐静脉血管内皮细胞取材方便,易于分离、培养、扩增, 所培养的细胞体外生长稳定,可作为骨组织工程的种子细胞。 第二部分 1,25-(OH)_2D_3在成骨细胞与血管内皮细胞联合培养中的作用 目的 研究人骨髓间质成骨细胞(hMSO)与脐静脉血管内皮细胞 (hUVEC)共培养时,1,25-(OH)_2D_3对细胞活性及碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素 (OCN)含量的影响。方法 以相同总细胞数接种24孔细胞培养板,1,25-(OH)_2D_3
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R318.0

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