收藏本站
《苏州大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究

卢奕  
【摘要】:【目的】:创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)发病率高,但传统治疗方法疗效有限。人羊膜细胞(human amniotic cells,HACs)具有多潜能性、移植后不会诱导免疫排斥反应、有足够的细胞来源,还可表达神经细胞特异标记,分泌神经营养因子。本实验拟将HACs 置于创伤性脑组织提取液的条件培养基中探究HACs 在体外模拟创伤性脑损伤微环境下的分化和增殖情况,并用HACs 和表达胶源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)的HACs 靶点移植于大鼠TBI 模型以探究二者分别对TBI 大鼠运动功能和海马神经元的影响。 【方法】:取无并发症剖宫产羊膜,剥离羊膜1 小时内用0.25%胰酶反复消化三次提取HACs,接种后48h 去除未贴壁的HACs。采用Feeney 法制作大鼠TBI 模型,TBI24h后制备创伤性脑组织提取液。将HACs分别接种于RPMI1640培养基(1640)、RPMI1640 培养基与正常脑组织提取液(1640+NB)、RPMI1640 培养基与创伤性脑组织提取液(1640+TBI)3 组。共培养7 天后倒置相差显微镜检测各组细胞形态。共培养前后分别行Nestin 和MAP2 单抗免疫组化检测。将HACs 以10000/ml 和100000/ml 两种密度分别接种上述3 种培养基,培养1 天、4 天、7 天后经酶联免疫检测仪行四氮唑盐(MTT)比色法检测。Hoechst33342 标记HACs 重悬调整细胞浓度为10~5/μl;采用Feeney 自由落体法打击大鼠脑皮层后肢运动区域,使损伤皮层对侧后肢运动功能受损。损伤后24h 经微量注射器和立体定向仪将Hoechst33342 标记的HACs 10μl 分别移植于挫伤灶中心和挫伤灶边缘。实验分治疗组(TBI+HACs)、对照组(TBI+PBS)和假TBI 组3 组。在TBI 后的28 天内采用钉板平衡木行走测试评估损伤皮层对侧后肢运动功能变化。运动功能检测结束后经心脏灌注4%多聚甲醛后取出脑组织制成切片后分别行荧光显微镜检测、HE 染色和MAP2 免疫组化染色检测。采用Feeney 法撞击部位以前囟人字缝中点矢状缝左侧2mm 为中心制作TBI 致海马神经元损伤模型。TBI24h 后各组于挫伤灶边缘,每处距硬脑膜4mm 和2mm 两点移植,共5μl 含5×10~5个细胞。TBI+GDNF 组移植表达GDNF 的HACs;TBI+eGFP 组移植表达eGFP 的HACs;TBI+PBS 组注射5μlPBS;假TBI 组不移植。移植7 天后开始每天行Morris 水迷宫定位航行试验。移植后12 天空间搜索试验结束后一部分取出脑组织检测损伤侧海马变化,一部分取移植靶点区域脑组织行RT-PCR 检测GDNFmRNA
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R651

知网文化
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 田有勇,汤翠菊,方思羽;骨髓间质干细胞及其在神经系统疾病中的应用研究进展[J];中华神经医学杂志;2003年01期
2 史长青,刘永明;自体MSC的研究现状与临床展望[J];长治医学院学报;2004年01期
3 胡建,王正国,朱佩芳,李兵仓,李应玉;胚胎脊髓移植对宿主脊髓神经毡结构重筑的电镜定量观察[J];第三军医大学学报;1998年04期
4 谢兴文;李晶;许伟;;羌活鱼水提物在大鼠骨髓间充质细胞成骨中的作用[J];西部中医药;2012年01期
5 李洪钧,冯义;不同类型干细胞移植治疗神经损伤的新进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2003年02期
6 方小魁;华栋;李光早;;同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨材料修复兔尺骨缺损[J];蚌埠医学院学报;2014年03期
7 宋红松,樊东升;神经干细胞的研究现状及其在治疗缺血性卒中的应用[J];中国脑血管病杂志;2004年01期
8 邓宇斌;原清涛;刘晓刚;毕小彬;;猕猴骨髓间质干细胞移植修复脊髓损伤[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年20期
9 李晓霞;何志义;;静脉注射骨髓基质细胞后局灶性脑缺血大鼠胶质细胞源性神经营养因子的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年21期
10 司予北,高革;多糖衍生物治疗大鼠实验性骨质疏松效果观察(英文)[J];新乡医学院学报;2005年04期
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 程映华;神经干细胞修复脊髓损伤的组织工程学研究[D];苏州大学;2002年
2 林毅勇;急性缺氧对大鼠海马神经元NMDA诱发电流的影响及GDNF作用机制的研究[D];第二军医大学;2003年
3 钟池;骨髓基质细胞静脉注射治疗大鼠短暂性局灶性脑缺血的研究[D];复旦大学;2003年
4 何东宁;快速构建组织工程化骨的条件优选及eNOS对其作用机制的研究[D];第二军医大学;2005年
5 王春红;氟对骨髓基质细胞及其产物OPG、RANKL和相关细胞因子的影响[D];吉林大学;2006年
6 王晶;人类胚胎干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
7 高博;生长因子诱导骨髓基质干细胞向胆碱能神经元分化及其信号转导机制研究[D];苏州大学;2009年
8 闫志伟;细胞膜片策略应用于骨组织工程的初步研究[D];第四军医大学;2010年
9 魏璐婉;hBMP-6基因修饰的骨髓间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的实验研究[D];山东大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李振勇;脐带Wharton's jelly间充质干细胞的分离培养及诱导分化为多巴胺能样神经元研究[D];南方医科大学;2011年
2 黄小辉;NTF在颌面部神经发育中的表达及rhBMP-2对外周神经生长的作用[D];第四军医大学;2001年
3 袁林天;模拟失重大鼠牙体牙髓牙周组织的变化研究[D];第四军医大学;2001年
4 常红星;自体骨髓基质细胞体外培养促分化及经皮注射修复兔骨缺损的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
5 阴金波;基因修饰神经干细胞移植治疗PD的实验研究[D];第三军医大学;2002年
6 杜岩;釉基质蛋白促进牙周组织再生机理的初步研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 桂莉;大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及移植治疗脑梗塞的初步研究[D];第三军医大学;2003年
8 徐军;静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达[D];中国医科大学;2004年
9 范斌;静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局限性脑梗死及ICAM-1的表达[D];中国医科大学;2005年
10 姜扬;静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血BDNF表达的实验研究[D];中国医科大学;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;颅脑外科手术[J];国外科技资料目录(医药卫生);2002年08期
2 李茜;创伤性脑损伤的临床康复研究[J];总装备部医学学报;2003年03期
3 郭胜;卢颖;;大鼠创伤性脑损伤后肝肾功能的变化[J];齐齐哈尔医学院学报;2007年08期
4 刘科;唐文渊;;大鼠创伤性脑损伤VEGF表达的定量分析[J];中华神经外科疾病研究杂志;2008年02期
5 王军友;杨学军;;创伤性脑损伤后垂体功能低下[J];国际神经病学神经外科学杂志;2008年01期
6 鲁晓杰,刘道坤,黄长铭,陆岩;大剂量硫酸镁对颅脑创伤后神经功能影响的实验研究[J];苏州医学院学报;2000年01期
7 贺晓生;重视对创伤性脑损伤炎症反应的研究[J];第四军医大学学报;2004年09期
8 阿尤斯,丁美修;颅内压监护方法的进展[J];上海第二医科大学学报;2005年09期
9 张涛;朱军;;环氧合酶-2与脑损伤[J];中国煤炭工业医学杂志;2006年03期
10 陈罡;杭春华;史继新;王汉东;张鑫;李劲松;印红霞;;甲基强的松龙抑制颅脑外伤后核因子κB的表达[J];中华神经外科疾病研究杂志;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丛明;刘兴波;;免疫应答在创伤性脑损伤中的作用的研究进展[A];第四届中医药继续教育高峰论坛暨中华中医药学会继续教育分会换届选举会议论文集[C];2011年
2 吴秀杰;施炜;陈建;;Pirh2在创伤性脑损伤后促进p27的泛素化降解、参与胶质细胞的增殖过程[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
3 赵伟;施炜;陈建;;Hs1-Associated Protein X-1(Hax-1)在创伤性脑损伤(TBI)后的表达[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
4 伍建林;;SWI与DTI联合诊断与评价创伤性脑损伤-实验与临床研究[A];中华医学会第十八次全国放射学学术会议论文汇编[C];2011年
5 赵鸿;白祥军;;大电导钾通道(BK)在创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中的作用[A];《中华急诊医学杂志》第九届组稿会暨第二届急诊医学青年论坛全国急危重症与救援医学学习班论文汇编[C];2010年
6 刘科;方波;胡唏;程凯敏;邹胜伟;;创伤性脑损伤CT灌注成像的临床应用[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
7 刘科;方波;胡晞;程凯敏;邹胜伟;;创伤性脑损伤CT灌注成像的临床应用[A];第二届西部神经外科学术会议论文集[C];2010年
8 刘佰运;;创伤性脑缺血的研究进展[A];中国医师协会神经外科医师分会首届全国代表大会论文汇编[C];2005年
9 孙晓川;印晓鸿;;载脂蛋白E基因对轻中型创伤性脑损伤急性期脑电活动的影响[A];第二届西部神经外科学术会议论文集[C];2010年
10 刘科;唐文渊;;VEGF-165基因对创伤性脑损伤细胞凋亡影响的实验研究[A];《中华急诊医学杂志》第七届组稿会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 刘则扬;护理项目的成本核算[N];健康报;2004年
2 万同己;暨南大学研究证实:血瘀证与c-fos基因表达关系密切[N];中国医药报;2004年
3 刘霞;以蔗糖为原料可制造石墨烯[N];科技日报;2011年
4 葛新通 冯巳洋;新装备助力单兵作战[N];解放军报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周宏珍;中度创伤性脑损伤对海马内未成熟神经元作用机制的研究[D];南方医科大学;2011年
2 孔晓冬;自然杀伤细胞在创伤性脑损伤中的变化研究[D];天津医科大学;2014年
3 段虎斌;创伤性脑损伤神经源性机制及其干预实验研究[D];山西医科大学;2013年
4 杨利军;创伤性脑损伤的基础研究及相关脑脊液漏的临床治疗[D];河北医科大学;2013年
5 张竞文;弥散张量成像及磁敏感加权成像对创伤性脑损伤的实验与临床动态研究[D];天津医科大学;2011年
6 洪远;Nrf2-ARE通路在创伤性脑损伤中的作用及莱菔硫烷神经保护机制的实验研究[D];浙江大学;2011年
7 陈心;创伤性脑损伤后HPA轴功能障碍发病机理及糖皮质激素治疗的基础研究[D];天津医科大学;2012年
8 卢奕;人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究[D];苏州大学;2005年
9 刘科;VEGF-165基因对创伤性脑损伤保护作用的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
10 冯兴军;脑红蛋白对创伤性脑损伤的保护作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 成睿;原代骨髓间充质干细胞治疗创伤性脑损伤大鼠模型[D];山西医科大学;2012年
2 周鹏;重组人促红细胞生成素对大鼠急性创伤性脑损伤的神经保护作用及机制[D];山西医科大学;2012年
3 郝强;骨髓间充质干细胞联合血管内皮生长因子对大鼠创伤性脑损伤细胞凋亡的抑制作用[D];山西医科大学;2012年
4 杨文桢;托吡酯对大鼠创伤性脑损伤的保护作用[D];兰州大学;2010年
5 姚焱鹏;高压氧对大鼠创伤性脑损伤神经元凋亡及凋亡相关因子的影响[D];兰州大学;2010年
6 袁致海;β微管蛋白在创伤性脑损伤大鼠脑组织中的表达规律[D];延安大学;2013年
7 惠浩;NKCC1在TBI损伤中的作用及其与Homer1a相互关系的研究[D];第四军医大学;2013年
8 李启华;创伤性脑损伤大鼠乙酰胆碱、脑源性神经生长因子表达变化的研究[D];山西医科大学;2012年
9 梁明;钙周期素结合蛋白在创伤性脑损伤中的表达及意义[D];第四军医大学;2012年
10 宋扬;降钙素基因相关肽在创伤性脑损伤加速骨折愈合机制中的作用[D];第四军医大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026