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《苏州大学》 2005年
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神经干细胞与脑肿瘤干细胞体外培养的生长特性比较

朱玉德  
【摘要】:【目的】探索人胚神经干细胞及胶质瘤肿瘤干细胞体外分离培养的条件,并观察比较其在体外分离培养的生长特性。用CD133免疫磁珠分选阳性细胞后为进一步研究提供材料。 【方法】神经干细胞:取米非司酮流产8-12周胎龄的人胚胎,从胎脑皮层分离组织,采用胰蛋白酶消化和机械吹打的方法获得单细胞悬液。采用无血清培养基(DMEM/F12),加入EGF和bFGF(20ng/ml)细胞因子和N_2添加剂刺激细胞增殖,从而进行体外扩增培养、连续传代。添加10%胎牛血清诱导分化,免疫细胞化学鉴定神经干细胞(Nestin)和分化成熟的神经元(NSE)、星形胶质细胞(GFAP)及少突胶质细胞(CNP)。胶质瘤肿瘤干细胞:将SHG44细胞系和人脑胶质瘤手术标本采用胰蛋白酶消化获得单细胞,用CD133免疫磁珠分离阳性细胞、之后分别应用无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、EGF)培养。形成肿瘤球后用添加10%胎牛血清诱导分化,免疫细胞化学染色检测肿瘤球细胞及其分化细胞中的Nestin、NSE、GFAP阳性细胞。神经干细胞和肿瘤干细胞在下一步应用之前均行CD133免疫磁珠复选。同一时间点行流式细胞仪检测细胞周期,比较增殖活力。 【结果】从人胎脑分离的细胞培养在含有EGF和bFGF的无血清培
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