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《苏州大学》 2006年
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盐酸克仑特罗单克隆抗体免疫检测试剂盒研制

邵景东  
【摘要】: [目的]通过盐酸克伦特罗抗原的合成和单克隆抗体的研制,建立盐酸克伦特罗的间接酶联免疫检测方法并研制盐酸克伦特罗检测试剂盒。 [方法] 盐酸克伦特罗抗原的合成和单克隆抗体的研制:用重氮化法将盐酸克伦特罗(CL)分子与载体蛋白偶联,分别制备免疫抗原和包被抗原;以免疫抗原免疫Balb/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备杂交瘤细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选能分泌盐酸克伦特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞;筛选的杂交瘤细胞接种实验动物制备盐酸克伦特罗抗体,通过灵敏度试验以及单抗与四环素、沙丁胺醇、肾上腺素等结构类似物交叉反应试验筛选出高灵敏度和高特异性的CL单抗。 盐酸克伦特罗间接竞争ELISA检测试剂盒的研究:以重氮化法将盐酸克伦特罗与卵清蛋白偶联制备包被抗原(CL-OVA);以盐酸克伦特罗作为竞争的半抗原,与定量的抗克伦特罗单克隆抗体反应,通过对包被抗原浓度、抗CL-McAb工作浓度、酶标二抗的工作浓度等反应条件优化试验,建立盐酸克伦特罗间接竞争ELISA检测方法并研制克伦特罗快速检测试剂盒;经样品加标回收试验和进口试剂盒的比对试验,研究其可行性。 [结果] (1)通过实验分离得到3株特异性分泌盐酸克仑特罗的细胞株,编号分别为CL-2F12,CL-3C3,CL-4F3,经特异性试验筛选出无交叉反应CL-3C3细胞株;抗CL单抗3C3的敏感性试验表明,在CL浓度为0.1-10ng/mL间,r=-0.9961,具有良好的相关性。 (2)通过研究建立了盐酸克伦特罗竞争ELISA检测方法并研制了检测试剂盒,线性范围为0.05-12.5ng/mL,最小检测量为0.1ng/mL,批内和批间的变异系数分别为2.84%和5.92%,平均回收率为83.45%,灵敏度为0.95,曲线方程Y=0.4923-0.3448lgX ,r=-0.9939;对540份临床送检阳性样本进行检测,与进口试剂盒(荷兰E-D)比较,阳性样品再用GC-MS确认,两者阳性符合率为96.39%。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R155.5

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【参考文献】
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