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《苏州大学》 2006年
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人BDNF在CHO及大肠杆菌中的表达及功能研究

赵耀东  
【摘要】: 目的:将人脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF)基因在真核及原核表达系统中进行重组表达,并检测所表达蛋白的功能,为开发高活性的hBDNF基因重组蛋白和基因治疗载体奠定基础。 方法:将由本科室构建和保存的人BDNF基因真核表达载体pTracerTM- EV/V5-His-hBDNF鉴定后导入CHO细胞中进行表达;同时将本科室所保存的质粒pBV220-BDNF的BDNF基因酶切后重组到表达效果更高的原核载体pET3.0a+上,鉴定后导入原核细胞中进行表达。并用SDS-PAGE、RT-PCR、Western-blot、MTT法检测促PC12细胞生长等方法进行其抗原性和生物学活性的检测。 结果:原核载体重组构建成功。原核和真核表达载体分别在大肠杆菌和CHO细胞中均获成功表达。在大肠杆菌中表达的包涵体蛋白约占菌体总蛋白的37.9%,通过透析复性后,获得具有活性的表达蛋白。该复性后蛋白和CHO细胞表达产物均具有较好的抗原活性促进PC12细胞生长的生物学功能。 结论:人BDNF基因在CHO细胞和大肠杆菌中均获成功表达,表达蛋白具有良好的抗原性和生物学活性,此实验为生物工程技术研制rhBDNF蛋白和基因治疗载体提供了依据。
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R392

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