收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

rhIL-24对A375黑色素瘤细胞体内外抗肿瘤效应及其分子机理的研究

赵小瑜  
【摘要】: 目的:为研究以hIL-24基因构建的原核表达载体pET-21a(+)/ hIL-24在大肠杆菌中表达及其部分纯化、复性得到的蛋白产物——重组人白介素24(rhIL-24)对A375黑色素瘤细胞体内外的抗肿瘤效应及其分子机理。 方法:以原核表达载体pBV220-hIL-24为模板构建新的pET-21a(+)/hIL-24重组原核表达载体系统,并在大肠杆菌中获得高效表达,将表达产物纯化、复性后得到初步纯化的rhIL-24,经Western-blot方法鉴定后,用rhIL-24刺激PBMC,收集细胞培养液上清,用ELISA方法检测PBMC分泌的IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量。用rhIL-24作用于体外培养的人A375黑色素瘤细胞,用MTT法去评价rhIL-24对A375细胞生长的影响,绘制出细胞生长曲线;通过流式细胞术(FCM),荧光染色等检测rhIL-24对A375细胞生长周期和凋亡的影响。用rhIL-24作用于鸡胚尿囊膜(CAM),观察其对血管新生的影响。在裸鼠真皮下建立人A375细胞黑色素瘤动物模型后,用rhIL-24治疗,测量瘤体的体积及重量以检测rhIL-24等对瘤体生长的抑制作用。用免疫组化检测肿瘤组织中的BAX、BCL-2、CD34及VEGF的表达情况,以确认经rhIL-24治疗后肿瘤细胞生长是否受到抑制及肿瘤组织血管新生是否减少。 结果:经PCR及酶切产物电泳证实所克隆的基因长度与理论值接近,经序列测定证实所克隆的基因与GenBank报道的hIL-24序列完全一致,为474bp。构建的原核表达载体pET-21a(+)/ hIL-24,经双酶切和PCR鉴定,原核表达载体构建正确。pET-21a(+)/ hIL-24转染的BL21宿主菌诱导表达后裂解菌体、提取包涵体的内容物,再进行SDS-PAGE电泳,有一条18.5KD左右的蛋白条带出现,与理论值一致。Western-blot检测该产物能与IL-24抗体形成特异性条带。含pET-21a(+)/ hIL-24的宿主菌BL21经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,rhIL-24在大肠杆菌中获高效表达。初步纯化的rhIL-24能刺激PBMC增加IL-6、IFN-γ及TNF-α的分泌, 72


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 罗振革,高杰英,李红,彭虹,朱锡华;CD44单克隆抗体对人黑色素瘤细胞的体内外生物学特性的影响[J];中华微生物学和免疫学杂志;1996年05期
2 王结义;王龙生;宋家枻;陈幼妹;宋后燕;;从无血清连续培养细胞株大量提纯组织型纤溶酶原激活剂[J];生物工程学报;1988年03期
3 杜泽吉;;热中子和~(10)B(n,α)~7Li反应对B-16黑色素瘤细胞的RBE[J];国外医学(放射医学核医学分册);1988年02期
4 金静君;;氯化锂对黑色素瘤细胞的抗增殖作用及肌醇对其作用的逆转[J];福建医药杂志;1989年03期
5 刘云华;B.Weatherhead;;α-MSH和cAMP对黑色素瘤细胞的作用[J];解剖学报;1989年S1期
6 宋希白;胥彬;;乙双吗啉对B_(16)黑色素瘤细胞作用的形态学研究[J];实用肿瘤杂志;1989年04期
7 杨廷桐,李红梅,刘冬欣,方伟岗,郑杰,吴秉铨;具有不同成瘤和转移能力的人黑色素瘤细胞体内外生物学行为观察[J];中华病理学杂志;2000年04期
8 周建大;李文波;罗成群;谭建湘;汪阳;胡媛;陈孜孜;陈继业;李明;王少华;;内皮抑素基因抗黑色素瘤细胞高转移的动物研究[J];激光生物学报;2009年04期
9 贺莉芳;万启惠;刘晖;张曦;;家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤细胞的影响[J];中国公共卫生;2006年07期
10 张茹萍,许驰捷,曹蕙婷,季瑞华,张祖传;天花粉毒蛋白免疫毒素对黑色素瘤细胞的体外抑制[J];中国免疫学杂志;1993年06期
11 ;高温所致黑色素瘤细胞表面变化的超微组化观察[J];同济医科大学学报;1987年04期
12 张弘;丁晓燕;方廖琼;王智彪;乔海;;小鼠囊胚与黑色素瘤细胞共培养模型优化[J];中国细胞生物学学报;2010年05期
13 肖国宏;罗成群;唐国茂;周建大;;人内皮抑素基因转染原代成人黑色素瘤细胞[J];中南大学学报(医学版);2005年06期
14 余旭亚,李涛,林连兵,陈朝银,张荣庆;南蛇勒蛋白对黑色素瘤细胞的抑制及分化作用[J];中国生化药物杂志;2004年05期
15 孔灵玲,杨建文,王旭,梁桂华,杨庆媛,崔文;MMP-9与人黑色素瘤细胞生长相关性的研究[J];济宁医学院学报;2003年02期
16 付体辉;人黑色素瘤细胞体外抑制自身TIL细胞生长[J];国外医学(免疫学分册);1993年01期
17 王效杰;齐金萍;赵洪礼;关宝丽;聂晶;宋承辉;王军;;肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究[J];解剖科学进展;2005年04期
18 董学易;古强;孙涛;赵楠;赵秀兰;倪春生;车娜;孙保存;;转化生长因子-β和干扰素-γ对黑色素瘤细胞增殖 迁移和侵袭的影响作用研究[J];中国肿瘤临床;2010年03期
19 于津浦;人黑色素瘤细胞中HLA-G的表达可保护其免受NK细胞溶解[J];国外医学(免疫学分册);2000年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈炳卿;薛英本;薛英威;刘瑞海;;共轭亚油酸对鼠黑色素瘤细胞与转移相关的细胞行为的影响[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
2 桑红;;积雪甙对黑色素瘤细胞生长影响的实验研究[A];2002中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2002年
3 林治荣;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王卫华;郑士杰;;不同融合基因修饰的黑色素瘤细胞体外目的基因表达及体内致瘤性的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
4 向青;徐梅;肖诚;李红艳;徐波;郭宇鹏;耿传营;潘琳;房青;唐劲天;;空间环境对黑色素瘤细胞基因表达的影响[A];中国空间科学学会第16届空间生命学术研讨会论文摘要集[C];2005年
5 张诗武;孙保存;张丹芳;郭华;赵秀兰;;黑色素瘤细胞线形程序性坏死与血管生成拟态之间关系的形态学观察研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
6 林治荣;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王卫华;郑士杰;;不同融合基因修饰的黑色素瘤细胞体外目的基因表达及体内致瘤性的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
7 陈瑾;;DKK1对黑色素瘤细胞侵袭能力的抑制作用[A];中华医学会第十八次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2012年
8 宋旭;;长非编码RNA参与肿瘤发生发展过程[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年
9 向敏;顾振纶;梁中琴;周文轩;郭次仪;;熊果酸对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
10 向敏;顾振纶;梁中琴;周文轩;郭次仪;;熊果酸对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王一博;新型维甲酸衍生物的合成及对黑色素瘤细胞作用的研究[D];吉林大学;2018年
2 宋晓非;MiR-708靶向谓控LEF1基因介导Wnt信号通路对小鼠黑色素瘤细胞的增殖、EMT和凋亡的调控机制[D];山东大学;2018年
3 辛勇;负载TMZ与多功能磁性纳米粒的构建及靶向黑色素瘤细胞的研究[D];苏州大学;2017年
4 张汝益;全基因组短链非编码RNA文库筛选耐药黑色素瘤细胞及其初步机制研究[D];重庆医科大学;2018年
5 赵万洲;乙酰乳香酸(BC-4)抗肿瘤作用的分子机制及黑色素瘤细胞基本生物学特性的研究[D];中国协和医科大学;2001年
6 赵小瑜;rhIL-24对A375黑色素瘤细胞体内外抗肿瘤效应及其分子机理的研究[D];苏州大学;2006年
7 李群;Survivin的下调对内质网应激诱导的黑色素瘤细胞凋亡抗性的影响机制研究[D];安徽医科大学;2012年
8 林贤;黑色素瘤中线形程序性坏死和血管生成拟态的研究[D];天津医科大学;2016年
9 毕明超;玉米黄素对人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡和迁移的作用及其机制研究[D];吉林大学;2016年
10 傅怡;细胞—基质黏附和动脉粥样硬化斑块的局部水动力环境研究[D];华南理工大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王欣玮;RGS1在人黑色素瘤细胞中对PD-L1表达的调控及机制研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2018年
2 蓝弘文;MUC1对黑色素瘤细胞肺转移的作用及其分子机制研究[D];华中科技大学;2016年
3 殷娜;重楼皂苷Ⅰ对人黑色素瘤细胞的增殖抑制作用的研究[D];昆明医科大学;2015年
4 韩健;干扰素-γ对黑色素瘤细胞血管生成拟态的影响[D];天津医科大学;2015年
5 潘湘阳;核糖核酸酶抑制因子过表达对黑色素瘤细胞生长、凋亡、侵袭和转移的影响及分子机制研究[D];重庆医科大学;2012年
6 周忆新;裂解型基因重组腺病毒对人黑色素瘤细胞及小鼠肝癌抑瘤作用的实验研究[D];苏州大学;2007年
7 况东东;低场强高频纳秒脉冲电场对人黑色素瘤细胞生物学行为的影响[D];重庆大学;2017年
8 刘蓉;siPGK1增加黑色素瘤细胞对vemurafenib敏感性及其机制的初步探索[D];山西医科大学;2017年
9 兰天飞;灵芝多糖拮抗黑色素瘤细胞上清对腹腔巨噬细胞免疫功能抑制作用的研究[D];承德医学院;2011年
10 杨爱荣;红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375侵袭能力影响的实验研究[D];青海大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 通讯员 李静 记者 马跃华;黑色素瘤细胞生长可被抑制[N];光明日报;2013年
2 王小舒;未来治疗皮癌只需涂抹乳霜[N];北京日报;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978