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《苏州大学》 2007年
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干细胞标志蛋白ABCG2表达及其耐药性逆转的初探

储亮  
【摘要】: 第一部分:干细胞标志物:ABCG2在胶质瘤组织芯片中表达分析 目的:三磷酸腺苷结合盒转运体成员ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)是源于造血干细胞的标志物之一,在神经胶质瘤发生发展相关组织和细胞中的表达情况还不清楚。本文检测在不同恶性程度的人胶质瘤组织标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体和胶质瘤干细胞球体等组织芯片中的表达情况和分析其意义。 方法:制作布有不同恶性程度的人胶质瘤组织标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体和胶质瘤干细胞球体等组织芯片,用免疫组化方法检测ABCG2在组织芯片中的表达情况。 结果:在71例人胶质瘤组织标本中ABCG2的阳性率为26.8%,其中Ⅰ级11.1%,Ⅱ级8%,Ⅲ级43.5%,Ⅳ级42.9%;Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级比差异非常显著(X~2=10.710,P=0.001);在神经干细胞、裸小鼠移植瘤、脑肿瘤干细胞球体表达率为100%。在多种正常组织亦有不同程度的表达。在胶质瘤临床标本中ABCG2阳性细胞呈亲血管分布。 结论:作为造血干细胞标志物之一的ABCG2在胶质瘤干细胞、恶性程度高的胶质瘤组织标本和移植瘤组织亦高表达,并且呈亲血管分布,可作为胶质瘤发生发展进程中血管形成的相关分子作进一步研究。 第二部分:脑肿瘤干细胞耐药及其逆转药物尼卡地平的体外研究 目的:从人脑胶质瘤组织中分离、培养胶质瘤干细胞,并进一步研究胶质瘤干细胞的耐药性。 方法:1、采集人脑胶质瘤手术标本,原代培养形成肿瘤球,经免疫磁珠分离获取CD133~+细胞,继续传代培养。2、RT-PCR检测CD133~+细胞中ABCG2的表达量。3、MTT法研究ABCG2抑制剂—尼卡地平在逆转干细胞耐药方面所起的作用。4、流式细胞仪检测凋亡率。 结果:1、用CD133~+免疫磁珠的方法从人脑胶质瘤手术标本中分离肿瘤干细胞,这些细胞在体外培养时能长期维持呈球形生长,在适合的环境中随时能自我更新和增殖。2、在CD133~+细胞中高表达ABCG2。3、ABCG2抑制剂尼卡地平能够有效的逆转胶质瘤干细胞的米托蒽醌(MX)耐药性。4、ABCG2抑制剂尼卡地平与MX合用能够显著提高胶质瘤干细胞的凋亡率。 结论:CD133磁珠分离胶质瘤干细胞是行之有效的方法,这些细胞在体外能长期培养和传代,可为进一步研究胶质瘤生成细胞提供有用的材料。ABCG2抑制剂能够有效的逆转胶质瘤干细胞的耐药性,有望成为一种新的脑肿瘤瘤化疗药物。
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